星状病毒是一种极其常见的肠道疾病原,宿主繁杂,传播广泛,在全球均有分布,因其基因组不稳定,变异高发,致病性和细胞嗜性不断改变,具有大幅度危害生产和突破种间屏障而成为人畜共患病原的潜力。然而目前对于影响星状病毒在胞体内复制的蛋白质知之甚少,为深入研究星状病毒的感染复制过程增添了阻碍。猪星状1型（PAst V1）是较为经典的猪星状病毒的毒株,具有代表性,且其与人星状病毒的经典毒株在致病性等方面高度相似,是研究星状病毒的理想模型。ANXA8蛋白是膜联蛋白家族中的一种,在前期试验中已发现它可能对猪星状病毒复制产生影响,所以本试验选取猪星状病毒1型毒株和ANXA8蛋白作为材料,通过siRNA抑制、过表达和免疫荧光共聚焦成像等方法探究二者的关系,即ANXA8蛋白表达是否影响猪星状病毒1型的复制,并于猪星状病毒1型在宿主细胞内的复制过程中发挥作用,为探明星状病毒感染复制的机理,研析其传播及增殖机制奠定基础。本试验的第一阶段构建了pCAGGS-ANXA8真核表达质粒,将其转染入PK-15细胞,可过表达细胞中的ANXA8蛋白;于细菌裂解液上清中纯化获得具有功能活性的pET32a-ANXA8重组蛋白,用于后续试验中孵育病毒后接毒,与PK-15细胞中的ANXA8蛋白产生竞争性抑制作用;纯化获得pGEX6p1-ANXA8蛋白,制作拥有高特异性及敏感性的鼠源antiANXA8抗体,用于后续封闭部分PK-15细胞中ANXA8蛋白,减少其与病毒作用的试验。第二阶段研究ANXA8蛋白对PAst V-GX1毒株在PK-15细胞中的复制效率产生的影响。结果发现通过siRNA抑制ANXA8蛋白的转录可以显著降低PAst V1-GX1的滴度和复制水平。过表达ANXA8可以使细胞上清中的病毒量增加而不影响胞内病毒量。免疫荧光共聚焦成像的结果表明此病毒衣壳蛋白与部分ANXA8蛋白在细胞中有共定位。在添加外源性蛋白或蛋白抗体到达一定剂量时,可以产生较显著的抑制病毒复制的效果。但是在非敏感细胞系Vero细胞中表达猪源ANXA8蛋白,并不能使病毒在Vero细胞中的复制水平增加。综上所述,本试验发现ANXA8蛋白与PAst V1-GX1毒株在PK-15细胞中的复制有着密切关联,可以促进PAst V1-GX1毒株在宿主细胞内的复制,推测ANXA8蛋白可能参与PAst V-GX1在胞内的包装、转运或者释放过程,但是这种促进作用有种族特异性,不能增加Vero非敏感细胞对病毒的敏感性。