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实验一：Poldip2在介导细菌性脑膜炎小鼠脑内AQP4极性表达缺失中的作用及其机制研究
目的：探讨在小鼠细菌性脑膜炎(bacterial meningitis, BM)模型中，DNA聚合酶δ作用蛋白2(polymeraseδ-interactingprotein2,Poldip2)对水通道蛋白-4(aquaporin-4, AQP4)极性表达缺失的作用和机制，以及由此引起的脑内血脑屏障(blood-brain barrier, BBB)破坏和脑水肿发生。
方法：通过小脑延髓池注射B族溶血性链球菌制作昆明小鼠BM模型，在BM诱导前48h，经侧脑室(intracerebroventricular, i.c.v)注射Poldip2小干扰RNA(Poldip2 small interfering RNA Poldip2, Poldip2 siRNA )；在BM后1h，经鼻滴注人源重组蛋白Poldip2(recombinant human Poldip2, rh-Poldip2)；在BM前0.5h，经尾静脉静脉注射基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)抑制剂UK383367；Loeffler评分法评估神经功能；干湿重法测定脑含水量；透射电镜(transmission electron microscopy, TEM)检测星形胶质细胞肿胀和紧密连接；伊文斯兰(Evans Blue, EB)检测血脑屏障通透性；双重免疫荧光染色测定AQP4的极性表达；westernblot检测Poldip2、MMPs、肌营养不良聚糖蛋白(β-dystroglycan,β-DG)、闭锁连接蛋白-1(zonula occludens-1, ZO-1)、闭锁蛋白(occludin)、紧密连接蛋白(claudin-5)和神经胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein， GFAP)的蛋白表达情况，明胶酶谱实验检测MMPs的活性表达。
结果：在小鼠BM模型中，内源性Poldip2表达上调，AQP4发生极性表达缺失；给予Poldip2siRNA和UK383367注射后，均改善了BM模型小鼠神经功能，维持了血脑屏障的完整性，减轻了AQP4极性表达缺失；给予rh-Poldip2注射后，MMPs和GFAP蛋白表达增加，β-DG、ZO-1、occludin和claudin-5蛋白表达减少，而给予Poldip2siRNA后，MMPs和GFAP蛋白表达减少，β-DG、ZO-1、occludin和claudin-5蛋白表达增加；给予MMPs抑制剂UK383367注射后，β-DG、ZO-1、occludin和claudin-5蛋白表达上调，GFAP蛋白表达下调。
结论：在小鼠细菌性脑膜炎模型中，Poldip2表达上调，AQP4发生极性表达缺失；Poldip2通过MMPs/β-DG通路介导AQP4极性表达缺失；抑制Poldip2的表达可以减少AQP4极性表达缺失，进而减轻脑水肿和维持血脑屏障的完整性。
实验二：白藜芦醇通过调节miR-223-3p/NLRP3通路发挥对幼年大鼠脑膜炎模型中皮质神经元的保护作用
目的：探究白藜芦醇在大鼠细菌性脑膜炎(BM)模型中对神经元的保护作用及机制。
方法：通过小脑延髓池注射B族溶血性链球菌制作BM模型，经鼻滴注白藜芦醇和经侧脑室注射miR-223-3pantagomir。HE染色观察脑膜炎组织病理结构改变；Loeffler评分法评估神经功能；TUNEL染色检测神经元凋亡；免疫荧光染色检测IL-1β、IL-18、GFAP和Iba1的表达；Westernblot检测NLRP3、CC-1、IL-1β和IL-18的表达水平；实时荧光定量PCR检测miR-223-3p的表达水平；利用在线软件TargetScan查询与miR-223-3p互补的mRNA。
结果：与假手术对照组比较，BM模型组大鼠的脑膜增厚；神经功能评分明显降低(P<0.05)；TUNEL阳性神经元数量明显增多(P<0.05)；星形胶质细胞和小胶质细胞被激活；IL-1β和IL-18的免疫荧光强度明显增加(P<0.05)；NLRP3、CC1、IL-1β、IL-18和miR-223-3p的表达水平明显升高(P<0.05)。与BM模型组比较，白藜芦醇治疗组大鼠神经功能评分明显升高(P<0.05)；TUNEL阳性神经元数量明显减少(P<0.05)；星形胶质细胞和小胶质细胞炎症反应被抑制；IL-1β和IL-18荧光强度明显减弱(P<0.05)；NLRP3、CC1、IL-1β和IL-18蛋白表达明显降低，miR-223-3p的表达水平明显上调(P<0.05)。TargetScan查询显示miR-223-3p的部分核苷酸序列与NLRP3mRNA3制端的核苷酸序列互补；在白藜芦醇治疗的BM大鼠脑内，与antagomir对照组比较，miR-223-3pantagomir处理组NLRP3蛋白表达明显升高。
结论：在幼年大鼠BM模型中，白藜芦醇可能通过调节miR-223-3P/NLRP3通路减少神经元炎症性死亡，从而发挥对神经元的保护作用。
目的：探讨在小鼠细菌性脑膜炎(bacterial meningitis, BM)模型中，DNA聚合酶δ作用蛋白2(polymeraseδ-interactingprotein2,Poldip2)对水通道蛋白-4(aquaporin-4, AQP4)极性表达缺失的作用和机制，以及由此引起的脑内血脑屏障(blood-brain barrier, BBB)破坏和脑水肿发生。
方法：通过小脑延髓池注射B族溶血性链球菌制作昆明小鼠BM模型，在BM诱导前48h，经侧脑室(intracerebroventricular, i.c.v)注射Poldip2小干扰RNA(Poldip2 small interfering RNA Poldip2, Poldip2 siRNA )；在BM后1h，经鼻滴注人源重组蛋白Poldip2(recombinant human Poldip2, rh-Poldip2)；在BM前0.5h，经尾静脉静脉注射基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)抑制剂UK383367；Loeffler评分法评估神经功能；干湿重法测定脑含水量；透射电镜(transmission electron microscopy, TEM)检测星形胶质细胞肿胀和紧密连接；伊文斯兰(Evans Blue, EB)检测血脑屏障通透性；双重免疫荧光染色测定AQP4的极性表达；westernblot检测Poldip2、MMPs、肌营养不良聚糖蛋白(β-dystroglycan,β-DG)、闭锁连接蛋白-1(zonula occludens-1, ZO-1)、闭锁蛋白(occludin)、紧密连接蛋白(claudin-5)和神经胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein， GFAP)的蛋白表达情况，明胶酶谱实验检测MMPs的活性表达。
结果：在小鼠BM模型中，内源性Poldip2表达上调，AQP4发生极性表达缺失；给予Poldip2siRNA和UK383367注射后，均改善了BM模型小鼠神经功能，维持了血脑屏障的完整性，减轻了AQP4极性表达缺失；给予rh-Poldip2注射后，MMPs和GFAP蛋白表达增加，β-DG、ZO-1、occludin和claudin-5蛋白表达减少，而给予Poldip2siRNA后，MMPs和GFAP蛋白表达减少，β-DG、ZO-1、occludin和claudin-5蛋白表达增加；给予MMPs抑制剂UK383367注射后，β-DG、ZO-1、occludin和claudin-5蛋白表达上调，GFAP蛋白表达下调。
结论：在小鼠细菌性脑膜炎模型中，Poldip2表达上调，AQP4发生极性表达缺失；Poldip2通过MMPs/β-DG通路介导AQP4极性表达缺失；抑制Poldip2的表达可以减少AQP4极性表达缺失，进而减轻脑水肿和维持血脑屏障的完整性。
实验二：白藜芦醇通过调节miR-223-3p/NLRP3通路发挥对幼年大鼠脑膜炎模型中皮质神经元的保护作用
目的：探究白藜芦醇在大鼠细菌性脑膜炎(BM)模型中对神经元的保护作用及机制。
方法：通过小脑延髓池注射B族溶血性链球菌制作BM模型，经鼻滴注白藜芦醇和经侧脑室注射miR-223-3pantagomir。HE染色观察脑膜炎组织病理结构改变；Loeffler评分法评估神经功能；TUNEL染色检测神经元凋亡；免疫荧光染色检测IL-1β、IL-18、GFAP和Iba1的表达；Westernblot检测NLRP3、CC-1、IL-1β和IL-18的表达水平；实时荧光定量PCR检测miR-223-3p的表达水平；利用在线软件TargetScan查询与miR-223-3p互补的mRNA。
结果：与假手术对照组比较，BM模型组大鼠的脑膜增厚；神经功能评分明显降低(P<0.05)；TUNEL阳性神经元数量明显增多(P<0.05)；星形胶质细胞和小胶质细胞被激活；IL-1β和IL-18的免疫荧光强度明显增加(P<0.05)；NLRP3、CC1、IL-1β、IL-18和miR-223-3p的表达水平明显升高(P<0.05)。与BM模型组比较，白藜芦醇治疗组大鼠神经功能评分明显升高(P<0.05)；TUNEL阳性神经元数量明显减少(P<0.05)；星形胶质细胞和小胶质细胞炎症反应被抑制；IL-1β和IL-18荧光强度明显减弱(P<0.05)；NLRP3、CC1、IL-1β和IL-18蛋白表达明显降低，miR-223-3p的表达水平明显上调(P<0.05)。TargetScan查询显示miR-223-3p的部分核苷酸序列与NLRP3mRNA3制端的核苷酸序列互补；在白藜芦醇治疗的BM大鼠脑内，与antagomir对照组比较，miR-223-3pantagomir处理组NLRP3蛋白表达明显升高。
结论：在幼年大鼠BM模型中，白藜芦醇可能通过调节miR-223-3P/NLRP3通路减少神经元炎症性死亡，从而发挥对神经元的保护作用。