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p53基因是一种与人类许多肿瘤的发生发展都密切相关的肿瘤抑制基因，主要引起肿瘤细胞凋亡和细胞周期的抑制。利用基因转染技术将野生型p53cDNA转入肿瘤细胞可引起肿瘤细胞凋亡和生长抑制。以特异性的单克隆抗体为基因转染的载体，利用单克隆抗体的靶向定位作用进行肿瘤的基因治疗是基因转染技术的一个重要进展。本课题拟采用阳离子脂质体-单抗为载体，将带有人野生型p53cDNA的质粒DNA体外转染宫颈癌U14细胞，比较观察单抗-阳离子脂质体介导p53基因的转染及表达，为进一步探讨单抗-阳离子脂质体体内基因转染和宫颈癌的基因治疗提供实验依据。本实验以修饰的碱裂解法从扩增的E Coli.大肠杆菌中提取纯化含wt-p53的质粒DNA，用辛酸-硫酸铵法纯化单抗Au14-1；以MBS为中介，与带有正电荷的多聚赖氨酸（PL）偶联，形成Au14-1与多聚赖氨酸的偶联复合物（Au14-1-PL），并将其与阳离子脂质体Lipofectin、质粒DNA混合，构成靶向基因转染载体。实验共分七组：空白对照组；DNA组；DNA+脂质体组；Au14-1+DNA+脂质体组；Au14-1+DNA组；M5+DNA+脂质体组； M5+DNA组（M5为Au14-1的对照单抗）。体外瞬时转染悬浮培养的宫颈癌U14细胞12h后加入含10%胎牛血清的RPMI 1640完全培养基继续培养48h，然后用间接细胞酶免疫化学法比较观察p53蛋白的表达。实验发现： Au14-1-DNA -脂质体组、Au14-1-DNA组及DNA-脂质体组均可见特异的p53核蛋白染色；但Au14-1 -DNA-脂质体组和Au14-1-DNA组的p53核蛋白分布于整个胞核，而DNA-脂质体组p53核蛋白仅边集于核膜，其表达量较少。<WP=5>M5 -DNA -脂质体组、M5-DNA组、DNA组及空白对照组均无表达，整个细胞只见被苏木精染色的核膜。本实验结果表明，由单抗Au14-1构成的靶向基因转染载体能够特异地介导p53基因的转移并在靶细胞中表达，且表达效果优于单纯阳离子脂质体载体介导的转染。