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藤梨根为猕猴桃属植物中华猕猴桃(Actindia chinensis Planch)的干燥根,其味苦,性寒,具有清热利湿、解毒消肿、散瘀通络等作用。临床上主要用于肝炎、湿热黄疸、痢疾、风湿性关节炎、消化道肿瘤等。本课题对藤梨根进行了系统的化学成分研究,并对所获得的三萜类成分进行了抗肿瘤活性研究。采用硅胶柱色谱、C18反相柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱以及HPLC等方法,从藤梨根乙醇浸提物的乙酸乙酯部位共分离并鉴定了 18个化合物,其结构分别为:ursolic acid(1);2α,3α,24-trihydroxyolean-12-en-28-oic acid(2);corosolic acid(3);cleomiscosin A(4);isolariciresinal(5);7,8-trans-3,5’-dimethoxy-4’,7-epoxy-8,3’-neolignane-5,9,9’-triol(6);7R,8R-threo-4,7,9,9’-tetrahydroxy-3,3’-dimethoxy-8-O-4’-neolignan(7);7S,,8S,-threo-4,7,9,9’-tetrahydroxy-3,3’-dimethoxy-8-0-4’-neolignan(8);quercetin(9);3,5,7,3’,5’-pentahydroxyflavan(10);fraxetin(11);scopoletin(12);β-sitosterol(13);daucosterol(14);vanillic acid(15);methyl caffeate(16);2,6-dihydroxy-1,4-benzenedicarboxy lic acid dimethyl ester(17);2,3-dihydroxypropyl stearate(18)。其中,化合物 4,5,6,7,8,10,11,12,16,17,18为首次从该植物中分离得到。三萜类为藤梨根中主要的抗癌活性成分。采用MTT法对所获得三萜类成分1,2和3进行抗肺癌细胞增殖活性筛选。结果表明,化合物2和3对肺癌NCI-H292细胞有增殖抑制作用,其IC50值分别为29.28 μ和12.20 μM;同时,化合物3对肺癌A549细胞也有一定的增殖抑制作用,其IC50值为33.83 μM。我们选取藤梨根中含量较大,对肺癌NCI-H292细胞有一定增殖抑制作用,对人脐静脉内皮EA.hy926细胞无毒性作用的化合物2(TLG-2)做进一步研究。MTT实验和细胞实时生长检测(RTCA)实验表明TLG-2能够剂量依赖性和时间依赖性的抑制肺癌NCI-H292细胞增殖;PI单染实验结果表明TLG-2并不能引起肺癌细胞周期的改变;DAPI染色实验和Annexin V/PI双染实验结果表明TLG-2能够诱导肺癌NCI-H292细胞凋亡。进一步的研究发现,TLG-2能够诱导细胞内ROS累积、线粒体膜电势(MMP)降低。Western blot结果表明TLG-2能诱导促凋亡蛋白Bax表达增加,抑凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL表达减少,细胞色素c(Cytochromec)释放,进一步激活caspase级联反应,导致细胞凋亡。Western blot结果和免疫荧光结果显示,TLG-2能促使凋亡诱导因子AIF入核,使核内的DNA断裂,引发凋亡。综上所述,TLG-2能够通过线粒体途径诱导细胞凋亡。去氢鸦胆苦醇B(DHB)是从鸦胆子中分离得到的苦木素类化合物,前期的研究表明DHB能够诱导肺癌A549和NCI-H292细胞凋亡。本课题主要研究DHB在低浓度下能够促进顺铂(CDDP)诱导的肺癌A549细胞凋亡。RTCA结果表明,DHB能够增强CDDP诱导的细胞增殖抑制作用;DAPI染色及Annexin V/PI双染的结果表明DHB能够促进CDDP诱导的细胞凋亡;DHB与CDDP联用,能够导致细胞MMP降低,细胞色素c释放以及AIF入核;进一步研究表明,DHB与CDDP联用能使凋亡相关蛋白的表达发生改变,如:促凋亡蛋白Bax表达增加,抑凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL表达减少;同时还能使活化的caspase-9、caspase-3以及PARP蛋白表达增加。这说明DHB能够通过线粒体介导的凋亡途径增强CDDP诱导的细胞凋亡。肿瘤细胞中的Nrf2高表达能够导致肿瘤细胞对化疗药物的耐药性。我们检测到DHB能够时间依赖性和剂量依赖性的降低A549细胞内Nrf2的表达,同时也能剂量依赖性的降低Nrf2下游蛋白的表达。RT-PCR结果显示,DHB能剂量依赖性的抑制Nrf2及其下游基因的表达,这可能使得细胞内的ROS累积,最终导致ROS诱导的线粒体凋亡。这些结果表明,DHB与CDDP联合使用具有协同抗肺癌的作用。