油菜内生真菌CanS-34A抗真菌物质的分离纯化及结构鉴定

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内生菌(endophytes)指的是在其生活史的部分或者全数阶段寄生于植物的组织内部,但不对植物造成危害的微生物。其中,内生真菌因其增强植物抗病性、产生活性代谢产物等作用,近年来成为寻找生防菌株的宝库。本研究对一株油菜内生真菌CanS-34A进行了分类属性鉴定,对其产生的抗真菌物质进行了防治油菜菌核病效果评估,以及化学结构解析。取得的研究结果如下:1.明确了菌株CanS-34A的分类属性采用形态特征观察和分子(ITS、RPB2、CaM及benA)鉴定方法,发现菌株CanS-34A属于Aspergillus capensis。2.明确了菌株CanS-34A代谢产物防治油菜菌核病效果通过平板对峙培养试验、发酵液抑制生长试验、离体及活体叶片接种等试验,发现菌株CanS-34A对核盘菌的拮抗性,其代谢产物能抑制核盘菌的菌丝扩展和菌核萌发,抑制核盘菌侵染。3.明确了菌株CanS-34A抗真菌物质的基本性质菌株CanS-34A抗真菌物质在60℃以下可保持活性,对紫外线辐射有一定的忍耐力,在碱性条件下活性较高。能特异性的抑制核盘菌科病原真菌(Sclerotinia属、Botrytis属和Monilinia属)及革兰氏阳性细菌。4.从CanS-34A发酵液分离获得3种抗真菌化合物采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、HPLC等方法对菌株CanS-34A抗真菌物质进行了分离和纯化,进而采用核磁共振和高分辨率质谱等方法对化合物纯品进行化学结构鉴定。发现所获得的3种化合物为penicillither、methyl dichloroasterrate和rosellichalasin。生物活性测定结果表明,这些化合物对核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)、三叶草核盘菌(Sclerotinia trifoliorum)、灰葡萄孢(Botrytis cinerea)及桃褐腐(Monilinia fructicola)均表现出抑制效果,其中rosellichalasin对核盘菌的抑制效果最强。以上研究结果为开发菌株CanS-34A活性代谢物质防治油菜菌核病打下了基础。
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