论文部分内容阅读
平菇是我国广泛栽培的食用菌,其营养价值和药用价值深受广大消费者青睐。但在园艺设施条件下生产平菇,时常遭遇高温的突袭,导致菌丝活力下降,易遭遇木霉侵染,出菇推迟甚至严重减产,因此高温是阻碍平菇生长和发育的主要因素之一。蛋白质组学作为功能基因组学研究的重要组分及生命生理机制研究的重要技术,已成功运用到食用菌各种机制的研究中。高温胁迫下平菇菌丝的响应途径、耐热性机理以及易遭木霉侵染等问题还尚不明确,因此本研究进行了高温胁迫条件优化、蛋白质差异表达和木霉侵染率的研究,旨在揭示高温胁迫响应机制,为选育具优良农艺性状的耐性品种提供理论基础。结果如下：(1)以糙皮侧耳(P. ostreatus) CCMSSC 00389, CCMSSC 00374;白黄侧耳(P. cornucopiae) CCMSSC 03989, CCMSSC 00358, CCMSSC 00329, CCMSSC 00406, CCMSSC 00360, CMSSC 00798, CCMSSC 00324, CCMSSC 00502, CCMSSC 00454等11株菌株为材料,以硫代巴比妥酸反应产物(TBARS)含量和生长恢复率为主要生理指标,确定菌龄3d、最适温度+12℃高温胁迫处理48h为最优高温胁迫条件；(2)利用iTRAQ结合LC-MS/MS技术分析不同处理下(40℃高温胁迫48h菌丝和对照、高温胁迫恢复生长3d菌丝和对照)糙皮侧耳CCMSSC 00389蛋白质的差异表达,共鉴定到686种蛋白质,204个蛋白质有显著性差异,其中共同表达的47个,单独对应热激和恢复表达的分别是84个和73个；GO分析表明,差异蛋白可分为23个功能分类,热胁迫中起主导作用的为蛋白调控、应激反应、运输途径等功能,亚细胞定位分析得出起主导作用的蛋白主要分布在线粒体、内质网、分泌途径及过氧物酶体中；(3)通过荧光定量RT-PCR验证了四个热激蛋白家族基因的转录情况,hsp60、 grp78、hsp90、hsp104经过40℃高温胁迫处理48h后分别上调28倍、6倍、10倍、15倍,恢复培养3d后基因转录表达量与对照无显著性差异,表明HSPs表达量的增加主要由Hsps基因在高温胁迫下转录表达量显著上调引起的,对菌丝抗高温胁迫起到重要作用；(4)11个平菇菌株对木霉抗性具有一定的差异,对峙培养7d后CCMSSC 00360, CCMSSC 00324, CCMSSC 00329侵染率低于60%,对木霉表现出一定的抗性,CCMSSC 03989和CCMSSC 00406受侵染面积达100%,不具抗木霉性；糙皮侧耳CCMSSC 00389菌丝40℃高温胁迫48h后细胞壁及膜均受到损伤,木霉侵染率增强,几乎全部覆盖：恢复培养3d后木霉侵染率下降,说明高温极易引起栽培中的大面积污染。