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布鲁氏菌病(Brucellosis)是由布鲁氏菌(Brucella)感染引的重要的人畜共患传染病之一，属于二类传染病。为了研究布鲁氏菌主要的外膜蛋白和细胞凋亡的关系。本研究克隆了布鲁氏菌外膜蛋白Omp10、Omp16、Omp19、Omp25、Omp28、Omp31、Omp2a基因，并将其连接到PET32-a、PGEX4T-1载体进行原核表达，纯化了相关蛋白。构建了外膜蛋白的真核表达载体，并制作了外膜蛋白Omp16、Omp19、Omp28的多克隆抗体。结果如下：1通过少量扩增布鲁氏菌，用细菌基因组试剂盒提取其基因组，设计引物，高保真酶扩增之后，通过rTaq酶PCR得到末端带有碱基A的布鲁氏菌主要外膜蛋白基因，与pMD18T载体连接过夜，转化，涂板，挑取克隆，摇菌，提取质粒，酶切鉴定，送交公司测序，结果表明所克隆的目的基因与GenBank中相应的基因序列同源性高达99%。2测序正确的布鲁氏菌外膜蛋白Omp10、Omp16、Omp19、Omp25、Omp28、Omp31、Omp2a基因，经过酶切胶回收，过夜连接，转化，涂板，挑取克隆，摇菌，提取质粒，酶切鉴定，我们将其成功连接到原核表达载体PET32-a、pGEX4T-1上，经酶切鉴定证明载体构建成功，然后将其转化到原核表达菌株大肠杆菌BL21细菌之中。3通过少量扩增布鲁氏菌，用细菌基因组试剂盒提取其基因组，设计引物，PCR得到布鲁氏菌主要外膜蛋白基因，胶回收目的片段，酶切目的片段与PEGFP-N1载体，过夜连接，转化涂板，挑取克隆，摇菌，提取质粒，酶切鉴定，送去公司测序，测序结果表明，成功得到布鲁氏菌外膜蛋白真核表达载体。4针对构建好的原核表达载体，在不同温度，不同诱导时间，不同IPTG诱导浓度的诱导下，我们成功的诱导了布鲁氏菌外膜蛋白Omp10、Omp16、Omp19、Omp28、Omp31、Omp2a，通过镍柱亲和层析，纯化了布鲁氏菌外膜的HIS融合蛋白Omp16、Omp19、Omp28，通过切胶及反复冻融方法纯化布鲁氏菌外膜的GST融合蛋白Omp31。通过免疫小鼠得到了布鲁氏菌外膜蛋白Omp16、Omp19、Omp28的多克隆抗体，其抗体的平均效价分别达到1:8×10~3、1:1×104以及1:1×10~4。上述结果为亚单位疫苗、动物免疫试验及诊断抗原的研制，以及细胞水平的疾病发生机理提供了必需的物质材料。