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大丽轮枝菌（Verticillium dahliae）是一种土传性植物病原真菌,能够使多种植物发生黄萎病,在世界范围内造成严重的经济损失。但是,目前对大丽轮枝菌的致病机制和遗传特性的研究还不够清楚。为了能有效防控黄萎病,需要在分子水平上探究病原菌的致病相关基因及其功能,从而为进一步了解其致病机理奠定基础,为控制黄萎病提供新的途径和手段。目前,关于大丽轮枝菌致病相关基因的研究取得了较大的进展,多个基因已被证明与大丽轮枝菌致病性相关。这些基因在其他物种中已经被研究过,已知道其具体的功能。但是在生物体基因组中还存在一些与某些功能有关但功能未知的基因,其编码的蛋白还是依据基因组信息推定的蛋白（假定蛋白）。假定蛋白是指因基因功能未知而未被鉴定的新基因编码的蛋白。随着大丽轮枝菌基因组测序的完成,识别这些未知蛋白将有助于发掘更多与大丽轮枝菌致病有关的基因,并分析其特点和功能,可以为研究黄萎病的致病机制提供更多的理论依据。从本实验室前期构建的大丽轮枝菌随机插入突变体库中,筛选到了菌丝生长较野生型旺盛的22号突变体,经过TAIL-PCR鉴定得到其插入位点突变基因为大丽轮枝菌VDAG09582.1基因。通过序列分析比对发现该基因编码一个假定蛋白。因此本研究着手利用基因敲除技术对其功能进行研究,通过构建基因敲除突变株,并与野生型菌株、随机插入突变菌株以及回复突变菌株进行了各项生理特性和致病性分析。取得了如下结果:1.利用融合PCR的方法,经过两轮PCR得到了同源重组片段,与pPK2载体连接后经双酶切和PCR反应验证后成功得到同源重组载体pPK2-UhphD。2.利用农杆菌介导的大丽轮枝菌的转化方法（Agrobacterium tumefaciensmediated transformation,ATMT）将带有目的基因的同源重组载体转入大丽轮枝菌中,成功获得能够稳定遗传的基因敲除转化子。3.比较了大丽轮枝菌VDAG09582.1基因敲除突变株、随机插入突变株、回复突变株和野生型大丽轮枝菌的菌落生长速度、产孢量、压力敏感性、微菌核形成情况、基内菌丝形态以及致病性。初步明确了大丽轮枝菌VDAG09582.1基因并未影响其生长速率、产孢量,且与大丽轮枝菌的致病性无关。但是VDAG09582.1基因与大丽轮枝菌耐酸性、耐碱性和耐盐性有关,且VDAG09582.1基因影响了大丽轮枝菌微菌核的形成和菌丝形态。