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目的结肠癌是常见的消化系恶性肿瘤之一,全球每年新发病例约800万人,占所有恶性肿瘤的10%～15%。近年来,结肠癌在我国的发病率有增高的趋势。随着医学的发展及人们对结肠癌研究的深入,对于结肠癌的发生、发展、预后以及治疗有了新的认识,然而结肠癌的发生机制仍未完全清楚。目前认为细胞凋亡的抑制及自噬活性的改变与结肠癌的发生、发展密切相关。细胞凋亡是细胞在基因调控下依赖于Caspase进行的自主的有序的程序性的细胞死亡(programmed cell death)方式。正常情况下,细胞通过诱导凋亡使细胞增殖和细胞死亡保持着动态平衡,从而保证细胞正常生长发育及维持机体内环境的稳定。然而,肿瘤的发生、发展中均存在细胞凋亡抑制的现象,研究发现,凋亡抑制蛋白家族(IAPs)在通过直接抑制凋亡蛋白酶(caspase)而实现抑制细胞凋亡的作用,其中,Livin是最近发现的凋亡抑制蛋白家族(IAPs)中的新成员,它在正常组织中低表达或不表达,而在一些癌组织或癌细胞株中高表达。从而推测,Livin与肿瘤的发生、发展存在一定的关系。自噬(autophagy)是真核细胞在自噬相关基因(autophagy related gene, Atg)的调控下利用溶酶体降解受损细胞器和大分子物质的过程,在维持细胞的代谢循环及细胞器的更新方面起重要作用,是细胞适应内外环境所需的一种基本调节方式。而自噬性细胞死亡是一种不同于凋亡、不依赖于Caspase的程序性死亡。研究发现在多种人类肿瘤中存在自噬活性的改变,因此,推测自噬活性异常与肿瘤的发生、发展密切相关,自从酵母模型建立,关于自噬的研究从细胞水平上升至分子水平,研究发现自噬的调节是一个复杂的过程,需要多种分子的参与,其中Beclin1(酵母ATG6的同系物)是介导哺乳动物自噬的特异性基因,是一种双等位抑癌基因。研究发现,beclin1不仅参与自噬体的形成,还促进自噬体的成熟,具有诱导自噬,促进肿瘤细胞凋亡,抑制其增殖的功能。本研究采用免疫组化及逆转录PCR (Reverse Transcription-PCR,RT-PCR)方法对不同类型结肠腺瘤组织及结肠癌中Beclin1、Livin因子的蛋白和mRNA水平进行检测,探讨这两种因子在正常组织、癌前病变及癌组织中的表达水平的变化规律,并讨论其与结肠癌发生、发展的关系。材料和方法收集2011年3月～2012年3月郑州大学第二附属医院确诊的结肠癌及不同类型的结肠腺瘤,经外科结肠癌根治术及结肠镜下所获得的新鲜标本共219例,将每次所获得的新鲜组织的一部分保护于RNA Waiter中,后存放于-80℃冰箱中,用于反转录PCR (Reverse Transcriptase-PCR,RT-PCR),另一部分的新鲜组织经10%甲醛固定、石蜡包埋、常规连续切片,用于免疫组织化学检测,同时收集患者临床资料。1采用免疫组织化学法检测结肠癌组织、结肠绒毛状腺瘤、结肠管状腺瘤及结肠正常黏膜中Beclin1、Livin蛋白的表达水平。2反转录PCR法检测结肠癌组织、结肠绒毛状腺瘤、结肠管状腺瘤及结肠正常黏膜中Beclin1、Livin mRNA的水平。3分析Beclinl和Livin表达与结肠癌临床病理参数的关系。利用SSPS17.0软件进行统计学分析。其中免疫组化染色结果用(?)±S表示,并进行单因素方差分析(ANOVA)F检验;RT-PCR用Kruskal-Wallis秩和检验,P<0.05认为差异有统计学意义。结果1Beclinl和Livin染色的阳性物质呈棕黄色,表达于细胞膜、胞质。二者在结肠癌组织、结肠绒毛状腺瘤、结肠管状腺瘤及结肠正常黏膜中表达的相对积分光密度值比较差异均有统计学意义(Beclinl:F=270.85,P=0.000; Livin:F=560.25,P=0.000), Beclin1和Livin蛋白在结肠癌组织和结肠腺瘤组织中的相对表达量均高于正常结肠黏膜中的表达。2Beclinl和Livin mRNA在结肠癌组织、结肠绒毛状腺瘤、结肠管状腺瘤及结肠正常黏膜中的相对表达量比较差异均有统计学意义(Beclinl:χ2=36.63, P=0.000; Livin:χ2=36.62,P=0.000), Beclinl和Livin mRNA在结肠癌组织和结肠腺瘤组织中的相对表达量均高于正常结肠黏膜中的表达。3Beclinl和Livin在结肠癌中的表达与性别、年龄、发病部位、病理类型及组织学分级无关。而与肿瘤的大小及是否有淋巴结转移有关且比较有统计学意义(P<0.05)。结论1Beclinl和Livin的蛋白和mRNA的表达水平在结肠正常黏膜、结肠管状腺瘤、结肠绒毛状腺瘤、结肠癌组织中呈逐渐增高的趋势,说明二者在结肠癌的癌变过程中呈动态变化,因此,推测Beclinl和Livin在结肠癌发生中可能是一个早期事件,联合检测可能有助于判断癌前病变的发展趋势,可作为早期结肠癌检测的指标。2Beclinl和Livin在结肠癌的不断发展中可能起着一定的作用,对其进行联合检测有助于结肠癌疗效观察、预后判断和复发监测。