【摘 要】
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心跳骤停发病紧急、危害严重,虽然心肺复苏技术的普及和其它辅助措施应用提高了复苏成功率,但脑保护效果依然不令人满意。如何有效的修复损伤神经元,减轻心肺复苏后中枢神经系统并发症,提高复苏后患者的存活率以及生存质量,仍然是亟待解决的临床医学难题。电针有着操作简单、方便可控、易于掌握、副作用小等优点。大量研究表明电针能够减少大鼠脑梗后的梗死体积,改善脑缺血引起的神经功能缺损,而抑制炎症反应是电针脑保护的重
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心跳骤停发病紧急、危害严重,虽然心肺复苏技术的普及和其它辅助措施应用提高了复苏成功率,但脑保护效果依然不令人满意。如何有效的修复损伤神经元,减轻心肺复苏后中枢神经系统并发症,提高复苏后患者的存活率以及生存质量,仍然是亟待解决的临床医学难题。电针有着操作简单、方便可控、易于掌握、副作用小等优点。大量研究表明电针能够减少大鼠脑梗后的梗死体积,改善脑缺血引起的神经功能缺损,而抑制炎症反应是电针脑保护的重要机制之一。心跳停止引起脑缺血,短时间内脑组织即可发生炎症反应,自主循环恢复后,大脑恢复血流再灌注也会过度产生炎性因子,这些都是导致神经元损伤的重要原因。因此本研究首先以窒息性心跳骤停大鼠为模型,模拟麻醉过程因气道阻塞造成心脏停跳的意外情况,通过行为学、形态学以及分子生化技术观察电针对大鼠复苏后脑损伤的影响。此外,胆碱能抗炎通路作为神经炎症反应的关键调控者,通路中的α7nAChR受体在炎性反应过程中发挥重要作用。敲除α7nAChR基因的小鼠,其促炎细胞因子的含量就会增加,上调α7nAChR减少缺血再灌小鼠梗死体积及神经元调亡数目。动物实验证实,电针改善缺血再灌注及痴呆大鼠的学习记忆认知障碍,其机制可能与上调α7nAChR减少炎性因子释放有关。本实验第二部分观察α7nAChR受体以及炎症因子在电针减轻心跳骤停后脑损伤过程中的作用,初步探讨其作用机制,为临床心跳骤停后脑损伤提供新的治疗思路。实验一电针对大鼠心肺复苏后脑损伤的影响目的:探讨电针对大鼠心肺复苏后脑损伤的保护作用及不同穴位之间的差异方法:雄性SD大鼠随机分五组:假手术组(Sham)、模型组(CA)、电针组1(EA1)、电针组2(EA2)、电针组3(EA3)。大鼠窒息8min后进行心肺复苏(CA),电针组于复苏同时分别在水沟、百会(EA1);水沟、内关穴(EA2);尾尖(EA 3)插入毫针并予以电针刺激。计算大鼠复苏成功率,记录复苏后各组大鼠自主循环恢复时间,于复苏后24h及72h对大鼠进行神经功能缺损评分(NDS),通过水迷宫检测各组大鼠学习记忆等行为能力,尼氏染色观察海马区神经元形态及存活数量。结果:各组大鼠复苏成功率差别无统计学意义。与Sham组相比,剩余各组24、72h NDS明显降低,海马CA区神经元存活数量也明显减少,大鼠空间学习记忆能力减弱;与CA相比,EA1、EA2自主循环恢复时间缩短,24、72h NDS明显增高,海马CA区神经元存活数量也明显增多,大鼠空间学习记忆能力增强;EA3与CA相比,上述指标的不同没有统计学差异;EA1在训练第二天逃避潜伏期明显缩短,EA2于第三天明显缩短,但其余指标的差异没有统计学意义。结论:联合刺激百会穴、水沟穴以及联合刺激水沟穴、内关穴可以改善心肺复苏后大鼠的脑损伤,在改善大鼠学习记忆方面,前者要优于后者。实验二电针通过调节α7nAChR表达减轻大鼠心肺复苏后脑损伤目的:探讨α7nAChR在电针对大鼠心肺复苏后脑保护中的作用方法:雄性SD大鼠随机分4组:假手术组(Sham)、模型组(CA)、电针组(EA)、电针组+甲基牛扁亭碱(EA+MLA)。大鼠窒息8min后进行心肺复苏(CA),电针组于复苏同时在水沟、百会插入毫针并予以电针刺激。EA+MLA在电针刺激后,经腹腔注射α7nAChR拮抗剂甲基牛扁亭碱。通过免疫荧光和Western blot检测各组大鼠海马及皮层α7nAChR的表达,通过Western blot检测海马及皮层炎性因子IL-1、IL-6、TNFα和小胶质细胞表面标志物Iba-1的表达。结果:与Sham组相比,其余各组α7nAChR明显降低,IL-1、IL-6、TNFα、Iba-1表达增高;EA组α7nAChR高于CA组,IL-1、IL-6、TNFα、Iba-1的表达低于CA组,然而使用拮抗剂MLA后,可以逆转EA产生的效应。结论:电针改善心跳骤停后的脑损伤,可能与激活α7nAChR表达,减少炎性因子产生,从而减轻神经炎性造成的脑损伤有关。
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