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在过去的100年里,全球共暴发四次流感病毒大流行,造成大量的人死亡。近几年,禽流感病毒如H7N9,造成散发的或小规模的人感染疫情,引起了极大的恐慌。此外,每年的季节性流感造成约300万至500万例严重疾病,其中约25万至50万例死亡。流感的防控形势非常严峻。接种流感疫苗是预防该疾病或疾病严重结果最有效的方法。目前我国流感疫苗的接种方式主要是肌肉注射,然而肌肉注射具有许多的缺点如需要专业医疗人员接种,疫苗用量大,疼痛和交叉感染。需要专业医疗人员接种导致大规模接种速率慢;疼痛导致接种者尤其儿童对有针恐惧,引起疫苗接种率低;交叉感染引起乙肝、丙肝和艾滋病等血液传播性传染病增多,而且成本高,造成流感疫苗的接种率低。因此,亟需寻找新的方法以解决上述问题。本论文基于目前面临的流感防控的严峻形式,开展了适用于制备可溶性流感微针疫苗的处方筛选,制备成的可溶性流感微针疫苗的体外和体内研究,以期新型流感可溶性微针疫苗,建立可溶性微针免疫系统,缓解面临流感严峻形势的压力。目的筛选出适宜于制备流感疫苗可溶性微针的水溶性材料,制备可有效刺穿皮肤角质层递送流感疫苗至皮内,引起免疫应答反应保护机体抵抗流感病毒感染流感H7N9可溶性微针和三价流感疫苗各单价疫苗可溶性微针。方法采用负压法制备流感H7N9微针疫苗,采用透射电镜和动态光散射分析仪检测微针制备过程中流感H7N9灭活病毒完整性和粒径变化情况,采用猪皮肤模拟人皮肤检测微针硬度是否可刺穿皮肤角质层,采用小动物活体成像仪检测可溶性流感H7N9疫苗微针作用后皮内抗原和肌肉注射后抗原存留时间随时间变化情况;使用BALB/C小鼠检测流感H7N9微针疫苗的体液免疫效果;采用荧光显微镜观察负载FITC标记的流感裂解疫苗可溶性微针内抗原分布情况;采用激光共聚焦结构照明超分辨荧光显微镜检测可溶性流感疫苗微针的刺入深度;将制备的负载三价流感病毒裂解疫苗各单价可溶性微针作用于预先处理腹部毛发的小鼠,检测免疫后特异性抗体水平和分泌IL-4细胞水平,此外并检测流感H1N1疫苗免疫后保护力。结果负压法制备五种负载流感H7N9可溶性微针;处方1和5可有效刺穿猪皮肤。透射电镜结果显示复溶后病毒颗粒完整未见明显的损伤;动态光散射结果显示复溶后处方1的流感病毒粒径增大明显,而处方5内流感病毒粒径变化小;小动物活体成像结果显示同样剂量的流感疫苗递送至皮内和肌肉内,则皮内的抗原存留时间较肌肉长;动物实验显示处方1和5产生了特异性抗体。第二部分进一步优化处方制备负载三价流感病毒裂解疫苗各单价的可溶性微针,结果显示微针皮内免疫可产生与肌肉相当或更高的免疫应答水平,具有与肌肉注射相当的保护力,而且具有更强病毒清除能力。结论制备出流感H7N9可溶性微针疫苗并可有效刺穿猪皮肤,免疫小鼠后可引起免疫应答。选择出新型可溶性微针处方,制备出负载三价流感疫苗各单价如H1N1、H3N2和B型可溶性疫苗微针,新制备方法可制备出仅在针体含有疫苗的分层微针,该微针疫苗可有效刺穿猪皮肤,动物实验中引起有效的免疫应答。本实验为进一步的可溶性微针流感疫苗研究奠定了基础。