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目的 正常肠上皮作为物理屏障限制肠道微生物入侵宿主。肠上皮细胞(Intestinal epithelial cells,IEC)极低表达TLR4和MD2,不与脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)反应。同时也产生许多效应分子抵御腔内微生物,维持天然防御反应。抗菌肽-如人类β防御素2(human β-defensin 2,HBD2)便是其中一类,其表达受细菌感染和促炎因子的调控。本研究以细胞因子TNF-α、IL-β、IFN-γ及LPS刺激HT-29结肠癌细胞系后,探讨HT-29细胞TLR4、MD2及HBD2在转录和蛋白水平的表达变化,及其与NF-κB激活的关系。 材料和方法 1 HT-29细胞分为8组,分别加入RPMI1640、TNF-α(20ng/ml)、IL-1β(20ng/ml)、IFN-γ(20ng/ml)、LPS(50ng/ml)、TNF-α(20ng/ml)+LPS(50ng/ml)、IL-1β(20ng/ml)+LPS(50ng/ml)、IFN-γ(20ng/ml)+LPS(50ng/ml)干预。 2 ELISA方法测定各组HT-29细胞上清液IL-8水平。 3 RT-PCR方法检测各组HT-29细胞TLR4、MD2、HBD2 mRNA表达。 4 免疫印迹方法检测各组HT-29细胞TLR4和NF-κB蛋白表达。 结果 1 细胞因子和细胞因子加LPS组上清液IL-8的表达显著高于对照组(p<0.01):HT-29细胞与细胞因子预孵育后再以LPS刺激,IL-8的表达进一步升高(p<0.01)。 2 细胞因子和细胞因子加LPS显著上调HT-29细胞TLR4和MD2mRNA的表达