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石杉碱甲(Huperzia A)是从蕨类植物蛇足石杉(Huperzia serrata(Thunb.)Trev.)分离得到的一种生物碱,是一种高效、可逆、高选择性的中枢乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂,对早老性痴呆(Alzheimer’s disease)、单纯性记忆障碍等神经退行性疾病具有显著的疗效,是治疗早老性痴呆的前景药物。随着越来越多的国家进入老龄化社会,早老性痴呆患者日益增多,对石杉碱甲的需求逐年增加,蛇足石杉的植物资源问题亟待解决。
本课题对蛇足石杉的无性繁殖特性进行了初步研究,并对蛇足石杉组织培养的技术路线及外植体的选择进行了初步摸索。野外采集的蛇足石杉在实验室条件下得到了新生的芽胞(gemma),并对芽胞的形态结构和萌发过程进行了研究。蛇足石杉组织培养的研究表明,由于蛇足石杉体内大量内生菌的存在,根、茎、叶不适合作为组织培养的外植体,芽胞和孢子由于没有内生菌的存在,是开展组织培养的良好材料。芽胞经过表面消毒,在培养基中可观察到新生芽胞的生长。孢子经诱导萌发并形成了原叶体,目前处于原叶体发育的第二阶段,为开展蛇足石杉的组织培养打下了基础。
在蛇足石杉孢子萌发过程中获得的一株蛇足石杉伴生蕨的原叶体,并完成了该植物的体外培养。利用分子生物学手段,并结合形态分类鉴定,确认该植物为沼泽蕨属植物Thelypteris acuminata(Houtt.)Morton。此外,在内生菌与蛇足石杉组织培养关系的研究中,首次从蛇足石杉体内分离到一株蓝细菌类微生物,目前正在开展该微生物的种属鉴定工作。