Genistein对Livin基因表达和恶性黑素瘤LiBr细胞凋亡、周期及增殖影响的实验研究

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目的阐明Genistein对恶性黑素瘤LiBr细胞Livin基因表达的影响和对恶性黑素瘤细胞凋亡、周期及增殖的作用,为进一步探索Genistein治疗恶性黑素瘤的可能性和揭示Genistein的抑癌机制提供实验依据。方法分别在基因和蛋白水平上应用RT-PCR和Western blot检测、确认恶性黑素瘤LiBr细胞Livin基因的表达;在体外以高表达Livin基因的恶性黑素瘤LiBr细胞为试验对象,应用RT-PCR检测Genistein作用LiBr细胞后Livin基因的表达变化,并初步探讨其剂量及时间效应;取最适浓度的Genistein作用LiBr细胞后应用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响;应用PI单染流式细胞术分析其对细胞周期的改变;应用Western blot检测其对凋亡效应蛋白caspase-3表达的影响及应用MTT比色法检测其对细胞增殖的作用。结果经RT-PCR和Western blot检测,恶性黑素瘤LiBr细胞高表达Livin基因;Genistein作用LiBr细胞后能显著下调Livin基因表达,并且下调过程呈剂量和时间依赖关系,40umol/L可达到最大下调效应,其下调Livin mRNA的最大效应出现在作用后96h;Genistein可显著诱导LiBr细胞凋亡,增加LiBr细胞早、晚期凋亡率,引起细胞G0/G1期阻滞,并能显著下调caspase-3蛋白表达及抑制细胞增殖。结论Genistein能显著下调恶性黑素瘤细胞Livin基因表达,并可诱导LiBr细胞凋亡、使细胞增殖周期进展受阻、抑制细胞增殖。
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