【摘 要】
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背景:非酒精性脂肪肝(NAFL)是一种在临床很常见的疾病,无过量饮酒史,以肝细胞脂肪变性和脂质贮积为特征的临床病理综合征,其发生发展涉及极其复杂的病理生理过程。其病理变化随病程的进展而表现有单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎、脂肪性肝纤维化和肝硬化甚至肝细胞癌。微小RNA(micorRNA,miR)是一类短链非编码RNA,miRNA是通过与目标靶基因的mRNA分子的3′端非编码区域(3′UTR)互补导致该m
【基金项目】
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项目名称:小鼠酒精性肝病的补体依赖性机制及干预,项目合同编号:81430014,项目来源:国家自然科学基金重点项目,项目起止时间:2015年1月至2019年12月; 项目名称:肝脏缺血再灌注损伤与肝脏再生的补体依赖性机制与调控研究,项目合同编号:81771674,项目来源:国家自然科学基金面上项目,项目起止时间:2018年1月-2021年12月; 项目名称:肝脏损伤与修复基础及临床应用研究,项目合
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背景:非酒精性脂肪肝(NAFL)是一种在临床很常见的疾病,无过量饮酒史,以肝细胞脂肪变性和脂质贮积为特征的临床病理综合征,其发生发展涉及极其复杂的病理生理过程。其病理变化随病程的进展而表现有单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎、脂肪性肝纤维化和肝硬化甚至肝细胞癌。微小RNA(micorRNA,miR)是一类短链非编码RNA,miRNA是通过与目标靶基因的mRNA分子的3′端非编码区域(3′UTR)互补导致该mRNA降解或翻译受到抑制继而影响下游蛋白的调控。我们发现miR-486在小鼠NAFL的肝组织中高表达,但是miR-486在NAFL中的作用尚不明确。本研究通过miR-486敲除小鼠和野生小鼠高脂模型饲料喂养来模拟NAFL,进而探讨miR-486对于NAFL的影响。目的:观察研究miR-486在小鼠非酒精性脂肪肝进展中的作用。方法:第一部分课题研究首先利用C57BL/6J小鼠通过高脂模型饲料喂养来模拟NAFL。实验分为对照组(WT-NCD组)和实验组(WT-HFD组),将同源的C57BL/6J小鼠随机分配每组4笼,每笼2只,每组8只。实验组小鼠喂食TP23400高脂模型饲料,对照组喂食TP23402低脂低糖对照饲料,每只小鼠每天喂食3g,喂养24周,并每4周称量一次体重。接着在实验结束后处死小鼠记录体重、肝重并收集其肝组织和血清做进一步检测。经过分析比较各组小鼠的周期体重变化、实验结束时体重、肝重、肝重体重比、肝内甘油三酯含量,和血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、水平,以及肝组织切片做苏木精-伊红(HE)和饱、油红O染色的结果,我们可以证实NAFL对小鼠体重、肝脏以及血液生化等的影响,同时也可以评估造模的情况。在造模成功后,本课题通过实时荧光定量聚合酶链反应检测肝内miR-486水平,探究miR-486与NAFL的疾病进展是否有联系;在证实了miR-486与NAFL的疾病进展有联系后,第二部分课题研究通过引入miR-486敲除小鼠和C57BL/6J小鼠一起进行高脂模型饲料喂养来模拟NAFL,进而探究miR-486在小鼠非酒精性脂肪肝进展中的功能。实验分为miR-486敲除对照组(KO-NCD组)、miR-486敲除实验组(KO-HFD组)、野生对照组(WT-NCD组)和野生实验组(WT-HFD组),将同源的miR-486敲除小鼠随机分随机分配每组4笼,每笼2只,每组8只。实验组小鼠喂食TP23400高脂模型饲料,对照组喂食TP23402低脂低糖对照饲料,每只小鼠每天喂食3 g,喂养24周,并每4周称量一次体重。实验结束后处死小鼠记录体重、肝重并收集其肝组织和血清做进一步检测。经过分析比较各组小鼠的周期体重变化、实验结束时体重、肝重、肝重体重比、肝内甘油三酯含量,和血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,以及肝组织切片做苏木精-伊红(HE)和饱、油红O染色的结果,我们可以证实miR-486在小鼠非酒精性脂肪肝进展中的功能。接着本课题通过蛋白印迹法检测脂质代谢相关分子AMPK和ACC的蛋白水平,进而探究miR-486在小鼠非酒精性脂肪肝进展中的作用是不是与脂质代谢有关。结果:第一部分:WT-NCD组小鼠体重低于WT-HFD组,HE染色和饱和油红O染色显示,WT-HFD组肝脏脂肪变最严重,WT-NCD组脂肪变明显较轻。与WT-HFD组相比较,WT-NCD组的血清ALT、AST和TNF-α明显较低,差异有统计学显著性;WT-HFD组miR-486的水平比WT-NCD组较高,差异有统计学显著性。第二部分:KO-HFD组小鼠体重低于WT-HFD组,HE染色和饱和油红O染色显示,WT-HFD组肝脏脂肪变最严重,KO-HFD组脂肪变明显改善。与WT-HFD组相比较,KO-HFD组的血清ALT、AST和TNF-α均明显降低,差异有统计学显著性;与WT-HFD组比较,KO-HFD组AMPK的mRNA水平较高,而ACC的mRNA水平较低,差异有统计学显著性。结论:MiR-486敲除可以减轻小鼠非酒精性脂肪肝病,其机制可能是通过调节脂质代谢来实现的。
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