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一、 CB6F1小鼠荷瘤模型的建立目的建立稳定的、可供照射半相合淋巴细胞输注研究的小鼠模型。方法SPF级健康雌性6-8周龄BALB/c×C57BL/6杂交F1代小鼠分为3组,每组5只,将C57BL/6来源的Hepa1-6肝癌细胞接种于CB6F1小鼠右侧腋窝皮下,每2-3天观察接种Hepa1-6细胞后F1小鼠肿瘤的生长情况,测量小鼠肿瘤大小、体重变化,探索Hepa1-6细胞在F1小鼠的成瘤性;取小鼠瘤块、肝、肠、肺、脾进行病理学观察。结果每只CB6F1小鼠右腋皮下接种4×106个Hepa1-6细胞3、4天后,肿瘤开始长出,成瘤率为100%,接种后肿瘤生长速度尚均匀,各组之间差异无统计学意义。肿瘤无自发缓解,全部小鼠死于肿瘤。病理学检查证实小鼠的皮下肿瘤组织为低分化肝癌,肺内见转移癌,其它脏器未见转移瘤。结论C57BL/6来源的Hepa1-6细胞可以在CB6F1小鼠身上稳定成瘤。二、不同剂量环磷酰胺联合受照射半相合淋巴细胞抗小鼠移植肝癌的作用目的观察不同剂量环磷酰胺(CTX)预处理小鼠后,联合经5Gy60Co照射的半相合淋巴细胞输注(HLI)的抗小鼠移植肝癌作用。方法以皮下接种Hepa1-6肝癌细胞的BABL/c×C57BL杂交F1代雌性小鼠(表型为H-2b/d)为受鼠,以BALB/c×C3H杂交F1代雌性小鼠(表型为H-2d/k)为MHC半相合的供者。受者荷瘤鼠分为5组:PBS组(尾静脉注射PBS),CTX80mg/kg+SP/irr组(按80mg/kg腹腔注射环磷酰胺+尾静脉输注经5Gy60Co照射的CC3HF1小鼠的脾细胞),CTX200mg/kg+SP/irr组(按200mg/kg腹腔注射环磷酰胺+尾静脉输注经5Gy60Co照射的CC3HF1小鼠的脾细胞),CTX300mg/kg+SP/irr组(按300mg/kg腹腔注射环磷酰胺+尾静脉输注经5Gy60Co照射的CC3HF1小鼠的脾细胞),SP/irr组(尾静脉输注经5Gy60Co照射的CC3HF1小鼠的脾细胞)。1)观测小鼠瘤体积、小鼠体重、生存时间及一般情况变化。2)在输注治疗一天后,取荷瘤小鼠肝、肠、皮肤、脾脏做组织病理切片,并进行HE染色,检测有无GvHD产生。3)流式细胞术检测供者小鼠淋巴细胞在受者小鼠体内的嵌合度,以及荷瘤小鼠淋巴细胞亚群的变化。4)ELISA检测外周血中IL-2、IFN-γ。5)LDH法检测输注后第10天宿主脾细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。结果80、200mg CTX联合HLI组的瘤体积小于PBS组【(1.25±0.24)cm3、(1.38±0.31) cm3vs (2.03±0.24) cm3,P<0.01】,小鼠生存时间显著长于PBS组【48d(39d,55d)、45d(35d,50d) vs35d(18d,39d),P<0.05】。80mg CTX联合HLI组的抑瘤作用强于单纯HLI组【(1.25±0.24)cm3vs (1.76±0.40)cm3,P<0.05】。300mg CTX联合HLI组和单纯HLI组无明显抑瘤作用。各治疗组小鼠均未出现GvHD。80、200mg CTX联合HLI组小鼠嵌合度低于300mg CTX联合HLI组,且消失时间明显早于后者。80、200mg CTX联合HLI组可以有效增加I型细胞因子IL-2、IFN-γ的分泌,提高淋巴细胞亚群CD8+T细胞和NK细胞的增殖。在输注后第10天,80、200mg CTX联合HLI组小鼠脾细胞对肿瘤细胞仍有较强的杀伤作用。结论在F1→F1小鼠的输注模型中,低剂量CTX联合输注经5Gy60Co照射的半相合供者淋巴细胞可获得较好的抗小鼠移植肝癌作用,CTX剂量增加后,未见明显抗肿瘤作用增强。半相合淋巴细胞输注可诱发淋巴细胞亚群的增殖,特别是CD8+T、NK细胞,增加Ⅰ型细胞因子IL-2、IFN-γ的分泌,提高宿主对肿瘤细胞的杀伤。