论文部分内容阅读
目的：体外观察不同浓度的同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)单用和联用MgCl2对A7r5细胞增殖及其基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase2, MMP-2)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase9, MMP-9)表达的影响，旨在进一步探讨 Hcy致动脉粥样硬化(artherosclerosis, AS)作用的分子机制及镁剂治疗的理论基础，为临床防治AS提供可靠的实验依据。 方法：⑴将不同浓度的Hcy与A7r5细胞体外共培养48 h,倒置显微镜下观察细胞的形态学改变；细胞计数及MTT法检测不同浓度的Hcy对A7r5细胞增殖的影响；流式细胞术检测细胞周期变化；逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹法（Western blot）检测不同浓度的Hcy对MMP-2、MMP-9 mRNA及其蛋白表达的影响。⑵0.50mmol/L Hcy分别与不同浓度的MgCl2共同作用A7r5细胞48 h后，细胞计数、MTT法及流式细胞术检测MgCl2对Hcy诱导的A7r5细胞增殖的影响；RT-PCR和Western blot法检测不同浓度的MgCl2对Hcy诱导的A7r5细胞MMP-2、MMP-9 mRNA及其蛋白表达的影响。 结果：⑴不同浓度的Hcy作用A7r5细胞48 h：①倒置显微镜下可见，对照组细胞贴壁生长，呈纺锤状，细胞数目相对较少，而实验组随着Hcy浓度的升高，细胞数目逐渐增多，体积增大，生长旺盛，呈增殖表现；②细胞计数结果显示，随着 Hcy浓度增加，A7r5细胞数目增多，各实验组与对照组差异具有显著性(P<0.05)，表明Hcy能促进A7r5细胞增殖；③MTT法结果显示，随着Hcy浓度增加，吸光度值逐渐增加，各实验组与对照组相比，P<0.05；④细胞周期结果显示，各浓度组 G1期细胞所占比例均低于对照组(P<0.05)，而 S期细胞比例均高于对照组(P<0.05)，表明Hcy能促使A7r5细胞从G1期向S期转化，DNA合成增加；⑤RT-PCR结果显示，不同浓度Hcy处理组MMP-2、MMP-9 mRNA的表达逐渐增加，其相对值与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)；⑥Western blot结果显示，Hcy使A7r5细胞MMP-2、MMP-9蛋白表达增加，各浓度组与对照组差异均有统计学意义(P<0.05)；⑦RT-PCR及Western blot结果均显示正常对照组中 MMP-2表达多于 MMP-9，MMP-9表达较少，分别为(3.60±1.42)％、(1.60±0.82)%。 ⑵0.50mmol/L Hcy与不同浓度的MgCl2共同作用A7r5细胞48 h：①细胞计数结果显示，A7r5细胞数目随MgCl2浓度的不断加大而减少，其中2.00、3.00mmol/L MgCl2组与对照组差异有统计学意义(P<0.05)；② MTT法结果显示，随着MgCl2浓度增加，吸光度值逐渐减少，各实验组与对照组相比，P<0.05；③细胞周期结果显示，MgCl2可抑制Hcy诱导的A7r5细胞从G1期向S期的转化，使S期细胞比例减少，DNA合成减少，其中2.00、3.00mmol/L MgCl2组与对照组差异有统计学意义(P<0.05)；④ RT-PCR结果显示，MgCl2对 Hcy诱导的A7r5细胞MMP-2、MMP-9 mRNA表达增加的效应具有抑制作用，抑制作用随MgCl2浓度增加而加强，2.00、3.00mmol/L MgCl2组与对照组差异有统计学意义(P<0.05)；⑤Western blot结果显示，MgCl2使Hcy诱导的A7r5细胞MMP-2、MMP-9的蛋白表达均减少，其中2.00、3.00mmol/L MgCl2组与对照组差异有统计学意义(P<0.05)。 结论：⑴ Hcy能促进A7r5细胞增殖，且这种效应能被MgCl2抑制。⑵正常A7r5细胞中MMP-2表达多于MMP-9，MMP-9表达较少或几乎不表达。⑶ Hcy可诱导A7r5细胞MMP-2、MMP-9的表达，且MgCl2对这种表达诱导效应具有抑制作用。