论文部分内容阅读
目的：青光眼的眼压增高与小梁网的氧化变性、流出阻力增加有关。原发性开角型青光眼(Primary Open Angle Glaucoma,POAG)患者中细胞外基质(Extracellular Matrix, ECM)的异常沉积可导致小梁网流出阻力增加。本实验主要研究在氧化应激状态下人眼小梁网细胞(Human Trabecular Meshwork Cells, HTMC)中细胞外基质的表达,以及miRNA-199b-5p对转化生长因子β2(Transforming Growth Factor-β2, TGF-β2)的作用。方法：在人眼小梁网细胞中,不同浓度过氧化氢(H202)刺激HTMC后,利用MTT实验检测细胞生长活性的变化。300uM H2O2刺激HTMC1.5h, real-timePCR和免疫组化分别检测细胞中TGF-β2和纤维连接蛋白(Fibronectin, FN)等细胞外基质基因和蛋白的表达。基因芯片检测在氧化应激状态下miRNA-199b-5p的表达,并用real-time PCR验证miRNA-199b-5p的表达。参考生物信息学miRNA-199b-5p靶定TGF-β2。 miRNA-199b-5p过表达检测其对HTMC功能的影响并检测miRNA-199b-5p对TGF-β2的作用。结果：在人眼小梁网细胞中,H202可抑制细胞生长活性,H202可以促进TGF-β2和细胞外基质FN的表达：H202刺激HTMC后,TGF-β2表达在1h、2h、4h、8h、12h、24h较对照组增加,相对表达量分别为1.04±0.33,5.04±1.25,8.54±2.48,10.88±2.25,11.83±2.15,18.72±3.09,25.38±5.18,差异具有显著统计学意义(P<0.01)；FN表达在1h、2h、4h、8h、12h、24h较对照组增加,相对表达量分别为1.00±0.17,2.82±0.30,4.56±0.35,5.22±1.86,6.65±2.18,11.06±7.57,17.10±4.12,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。基因芯片和real-time PCR检测显示在氧化应激状态下miRNA-199b-5p表达下调,H202刺激HTMC后,miRNA199b-5p于1h、2h、4h、8h、12h、24h表达较对照组下调,相对表达量分别为1.00±0.16,0.50±0.17,0.57±0.39,0.41±0.14,0.45±0.09,0.38±0.12,0.17±0.04,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。在HTMC中过表达miRNA-199b-5p可抑制细胞的迁移能力,同时过表达miRNA-199b-5p可导致TGF-β2和FN的表达下调。在转染miRNA199b-5p mimics24h, HTMC中TGF-β2的相对表达量对照组为2.544±0.38,处理组为1.18±0.29,总体差异有统计学意义(P<0.05)；FN的相对表达量对照组为2.54+0.29,处理组为1.04±0.08,总体差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论：HTMC在氧化应激状态下TGF-β2表达增多,而miRNA-199b-5p表达降低。miRNA-199b-5p可以靶定TGF-β2的3’-UTR,对TGF-β2起负调控作用,可以推断氧化应激促进TGF-β2表达增加,与miRNA-199b-5p表达下调有关。同时氧化应激可促进HTMC细胞外基质FN分泌增加,可能与miRNA-199b-5p表达下调有一定关系。