北陵鸢尾ItDREB2基因的遗传转化及功能分析

来源 :东北林业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:hangxujie
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本文以北陵鸢尾ItDREB2基因为研究对象,以pBI121-It DREB为载体,分别对烟草和拟南芥进行遗传转化,并对转基因烟草和拟南芥在干旱、高盐胁迫下叶绿素含量、SOD活性、POD活性等生理指标进行测定;以pBI121-ItDREB-GFP为载体转化拟南芥,进行亚细胞定位;利用实时荧光定量RT-PCR技术分析转基因烟草下游基因调控表达;对转基因烟草形态学变化和生长发育状况进行观测。研究结果如下:1.根癌农杆菌介导,分别获得具有抗卡那霉素的转基因烟草和拟南芥抗性植株,经PCR和Northern杂交鉴定外源ItDREB2基因被整合到烟草和拟南芥的基因组中并成功表达。2.选取转ItDREB2基因的烟草和拟南芥抗性植株进行干旱、高盐胁迫处理,测定出转ItDREB2基因烟草和拟南芥植物体内叶绿素含量、SOD活性、POD活性都比非转基因烟草和拟南芥高,转基因烟草和拟南芥抗干旱、高盐能力得到了提高。3.利用实时荧光定量RT-PCR技术分析在干旱和高盐胁迫处理下ItDREB2基因相关下游基因的调控表达,结果显示,在非逆境下,多数候选基因表达量上调,在经过盐胁迫处理后Lea5、ERD10B、P5CS、HSF2基因的表达量显著上调,而ERD10C、APX、MnSOD、ZnSOD、Hsp90的表达量则显著下调。干旱处理下,除了ERD10B表达量下调,其它9个相关基因表达量都显著上调。结果表明ItDREB2基因的过表达,增强了转基因烟草对干旱、高盐的抗性,提高了转基因烟草在干旱、高盐环境下的适应能力。4转基因拟南芥亚细胞定位结果显示,ItDREB2基因大量定位在转基因拟南芥细胞质内。5通过对转ItDREB2基因烟草的形态学变化及生长发育状况观测,烟草叶片表皮扫描电镜显示转基因烟草叶片表皮腺毛增多;转基因烟草还有植株变低、株地径增加、节间距缩短、叶宽度变大、叶片增长,叶片数减少等明显的变化,说明转基因烟草顶端生长受到了抑制,营养生长期延长;转基因烟草开花时间延后,花期延长,花量增加,结实率提高,表明转基因烟草生殖生长得到强化。转ItDREB2基因烟草整个生命周期被延长。
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