新疆野扁桃TP-M13-SSR引物开发及遗传多样性应用研究

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新疆野扁桃(Prunus tenella Batsch.syn Amygdalus nana L.or Amygdalus ledebouriana Schlecht.),又被称为矮扁桃,蔷薇科桃属灌木,是极为珍贵的野生植物资源。本试验以研究新疆野扁桃的遗传多样性为目的,利用其全基因组数据设计引物,通过TP-M13-SSR技术和毛细管荧光电泳检测分析其多态性和遗传多样性,为该珍稀植物的保育工作提供理论依据。主要研究结果如下:(1)本试验充分利用新疆野扁桃全基因组序列,开发出新疆野扁桃TP-M13-SSR引物库,引物库中包含23627条序列,分为二、三、四、五、六核苷酸共5类重复类型,其中二核苷酸类型数量最多,五、六核苷酸数量极少。该引物库中的引物PCR产物以100-349 bp居多,而二核苷酸的PCR产物最大,六核苷酸的最小。(2)从引物库中筛选出12对多态性较好的TP-M13-SSR引物以供后续研究使用。经数据分析后发现,以上引物的PCR产物大小在100-300 bp之间,所选引物多为二碱基重复,仅有引物PT-2为三碱基重复。(3)在毛细管电泳荧光检测中,共选用4种荧光引物,其中荧光引物FAM峰型最为正常且特异峰清晰,不常发生非特异性峰。与之相反,荧光引物ROX所显示出的非特异峰种类数量最多,且特异峰不易辨认。在6种异常情况中,N+1峰出现次数最多,高低峰出现次数最少。(4)将12对引物与96份新疆野扁桃样品扩增后,可得出以上引物的等位基因数(No.of allele)均为2个,有效等位基因数(Ne)的范围为3.5310-9,观测杂合度(Ho)的范围为0-0.6667,期望杂合度(He)的范围为0.72-0.89,固定指数(F)的范围为0.25-1,香农指数(I)的范围为1.48-2.44,特异等位基因(Na)的范围为8-18,多态性信息含量(PIC)的范围为0.6690-0.8790,标记指数(MI)的范围为5.35-15.82,Nei’s多样性指数的范围为0.2195-0.4308,遗传相似性系数(Gst)的范围为0.0020-.00426,基因流(Nm)的范围为34.7560-252.1964。(5)在对居群的遗传多样性分析后,发现塔城地区的新疆野扁桃多态性与遗传多样性水平在5个居群中处于最高水平,托里居群处于最低水平。经UPGMA聚类后发现,托里与裕民的新疆野扁桃亲缘关系为最近,布尔津、哈巴河、塔城的新疆野扁桃均被单独聚为一类。
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