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背景与目的: 尽管在冠状动脉旁路移植术(CABG)和经皮冠状动脉介入治疗(PCI)取得了进展,尽管急诊PCI是成功的,仍有很大比例的冠状动脉疾病患者不适合CABG或PCI治疗或治疗效果不佳。作为补救措施的治疗性血管新生目前仍缺乏有确切疗效的无创方法。以往的体外研究提示β3肾上腺素受体(β3AR)激动剂有可能在缺血缺氧的部位诱导血管新生;在结扎冠状动脉后的慢性缺血性心脏病的大鼠模型中,非梗死心肌处于慢性缺血缺氧状态,因此本研究主要测试长期刺激β3AR能否在这种模型的非梗死心肌中诱导血管新生进而改善心功能。 方法: 通过结扎雄性Sprague Dawley大鼠的冠状动脉左前降支(LAD)创建慢性缺血性心脏病模型,假手术大鼠(S组)作为对照进行类似的手术,只是将缝线缠绕在LAD周围而不结扎。在手术的第7天通过心电图检查证实成功建立大面积心肌梗死诱导的慢性缺血性心脏病模型,并在手术的第10天将其随机分配到用选择性β3AR激动剂BRL37344(BRL)处理的B组、用选择性β3AR拮抗剂L748337处理的L组、注射溶剂的V组以及未处理的I组。 BRL和L748337均按200nmol/100g体重/天的剂量等摩尔给药,每天分两次腹壁皮下注射,间隔12小时,共用12周。每两周对大鼠称重一次以调整剂量。在治疗的第6周和第12周,用ELISA测量循环血和左心室(LV)非梗死心肌中的VEGF水平。在治疗的第12周,进行血流动力学测量以评估心脏功能,称重心室和心房,然后在心室中部于冠状面将左心室切成两半。从心底侧一半中分离出非梗死的LV游离壁用于免疫印迹法检测αSMA、β3AR和CD34的蛋白表达,以及用于ELISA法检测VEGF。而心尖侧一半则用于获取心室中部水平的连续横切切片、用免疫组织化学染色法分别检测αSMA、β3AR和CD34。Masson三色染色和TUNEL检测也在连续切片中进行,以评估血管新生对心室重塑的继发效应。为获得实际的血管密度,对用抗αSMA单克隆抗体免疫染色的切片在200倍的放大倍数下拍照,以缝合成可显示左心室整个横截面的大图像;人工计数其中所有管腔外径≥10μm的αSMA阳性的血管;使用软件人工测量整个横截面的面积。通过随后对αSMA阳性血管的血管密度的统计分析,将左心室游离壁非梗死心肌的心内膜侧半 壁心肌确定为研究区域,并在此区域用连续切片研究 αSMA-β3AR-CD34-三阳性血管的密度。将这些三阳性血管视为新生血管。用左心房进行与上述相同的研究。 结果: 在梗死诱导的慢性缺血性心脏病的大鼠模型中,用BRL长期选择性刺激β3AR既保留了左心室收缩和舒张功能,又减少了左心室和左心房的代偿性肥厚心肌中的间质纤维化和心肌细胞凋亡;这些作用与其中增加的新生动脉血管相关。新形成的血管的血管密度在左心室游离壁非梗死区更易缺血的心内膜侧半壁心肌中最高。在BRL治疗组中,LV游离壁的非梗死心肌中的VEGF和β3AR水平均明显增高,而循环VEGF没有增加;β3AR主要在新生血管中表达。由于血管新生及其继发效应如梗死边缘区存活心肌增加、心肌凋亡减少、心肌中的间质纤维化减少,在BRL治疗的大鼠中代偿性左心室和左心房肥厚得以维持。 结论: 本研究首次揭示,长期刺激β3AR可通过β3AR-VEGF途径在慢性缺血心肌中诱导在体血管新生而发挥心脏保护作用。这些发现可能为防治各种慢性缺血性疾病提供治疗性血管生成的非侵入性策略。