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目的：
观察橙皮素(hesperetin，HSP)对糖尿病大鼠肾功能和肾内动脉(ratintrarenalartery，RIA)肌原性反应的改善作用，并探讨其改善肌原性反应的作用机制。
方法：
1.将40只健康雄性SD大鼠随机分为4组(每组10只)：对照组，模型组，橙皮素低、高剂量组。除对照组外，其余各组大鼠腹腔注射链脲霉素(streptozocin，STZ)65mg·kg-1建立大鼠糖尿病模型，血糖水平大于16.7mmol·L-1且持续1周以上认为大鼠糖尿病模型造模成功。橙皮素低、高剂量组于注射STZ2周后分别灌胃橙皮素50和100mg·kg-1·d-1，持续4周，对照组和模型组灌胃等量0.1%羧甲基纤维素钠溶剂。分别在给药前，给药4周后将大鼠放入代谢笼，收集24h尿液，用于测定尿肌酐(Ucr)、尿蛋白、尿糖；实验结束时，麻醉大鼠，主动脉采血，用于测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、一氧化氮(NO)。
2.采用微血管张力法测定肾内动脉血管张力，观察橙皮素对糖尿病大鼠血管肌原性反应的影响。大鼠麻醉处死后，立刻打开腹腔取出肾脏，置于盛有4℃、pH7.4且用95%O2+5%CO2混合气体饱和的PSS溶液中，显微镜下仔细分离出大鼠肾内动脉，剪取直径为200-240μm、长度约为2mm的血管环，将其固定于DMT浴槽内张力换能器上，Chart7.3生物信号采集软件记录其张力变化。分别取4组大鼠的肾内动脉血管环，向悬挂有四组血管环的浴槽内分别累加苯肾上腺素（Phenylephrine，PE）（0.01，0.1，1，10，100μmol·L-1）、氯化钾（Potassiumchloride，KCl）（20，40，60，80，100mmol·L-1），引起血管环收缩，以对照组最大收缩幅度为100%，计算收缩百分比。向浴槽内分别加入PE（10μmol·L-1）、KCl（60mmol·L-1），当收缩达到坪台后向浴槽内累积加入乙酰胆碱（0.0001，0.001，0.01，0.1，1，10μmol·L-1）或硝普钠（0.01，0.1，1，10，100μmol·L-1），以最大收缩幅度为100%，建立浓度-舒张曲线。
3.通过抑制剂实验观察钾通道抑制剂对橙皮素舒张作用的影响。当对照组，模型组大鼠肾内动脉血管环对PE（10μmol·L-1）或KCl（60mmol·L-1）收缩反应达坪台时向浴槽内累积加橙皮素（10，30，60，100μmol·L-1），建立浓度-舒张曲线。选择最适舒张浓度，在加入橙皮素（30μmol·L-1）前10min分别加入Kv抑制剂4-AP（1mmol·L-1）、Kir抑制剂BaCl2（1mmol·L-1）、KCa抑制剂TEA（1mmol·L-1）、KATP抑制剂Gli（0.01mmol·L-1）观察抑制剂对橙皮素舒张作用的影响。以加入钾通道抑制剂后血管环收缩达坪台期收缩幅度为100%，计算橙皮素的舒张百分比。
4.Westernblot测定各组肾内动脉平滑肌细胞(ratintrarenalarterysmoothmusclecell，RIASMCs)Kv1.2，Kv1.5、Kir2.1与Kir6.1表达水平。
结果：
1.橙皮素改善糖尿病大鼠的肾功能。与对照组大鼠相比，模型组体重显著降低，给予橙皮素治疗后对糖尿病大鼠的体重减低有一定改善作用（P＜0.05）；模型组大鼠的血糖、总胆固醇、甘油三酯、饮水量、尿量水平显著升高（P＜0.01，P＜0.001），给予橙皮素治疗后对糖尿病大鼠的上述指标均有一定改善作用(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001)；实验结束时，模型组大鼠的血肌酐、尿素氮、尿蛋白、尿肌酐、尿糖水平显著升高（P＜0.01，P＜0.001），肾功能出现异常，给予橙皮素治疗后对糖尿病大鼠肾功能有改善作用（P＜0.05）；模型组大鼠的一氧化氮水平与对照组相比显著降低（P＜0.001），给予橙皮素治疗后对糖尿病大鼠一氧化氮水平有改善作用(P＜0.01，P＜0.001)。
2.橙皮素改善糖尿病大鼠肾内动脉的收缩功能。PE（0.01，0.1，1，10，100μmol·L-1）收缩各组大鼠肾内动脉，模型组和橙皮素低、高剂量组最大收缩率分别为（147.14±3.81）%，（124.18±3.23）%，（107.28±0.78）%，模型组分别与对照组和橙皮素低、高剂量组比较，收缩幅度升高，差异均有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）；KCl（20，40，60，80，100mmol·L-1）收缩各组大鼠肾内动脉，其最大收缩率分别为（174.66±4.83）%，（137.73±3.47）%，（106.97±3.14）%，模型组分别与对照组和橙皮素低、高剂量组比较，收缩幅度升高，差异均有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。
3.橙皮素改善糖尿病大鼠肾内动脉的舒张功能，乙酰胆碱或硝普钠对PE、KCl预收缩有浓度依赖性的舒张作用。结果表明，PE预收缩时，对照组、模型组和橙皮素低、高剂量组肾内动脉对乙酰胆碱的最大舒张率分别为（71.29±4.92）%，（51.5±4.96）%，（58.28±1.85）%和（65.29±2.29）%，对硝普钠的最大舒张率分别为（83.28±0.96）%，（71.11±1.42）%，（75.43±1.99）%和（78.98±1.10）%，模型组分别与对照组和橙皮素低、高剂量组比较，舒张幅度下降，差异均有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）；KCl预收缩时，各组肾内动脉对乙酰胆碱的最大舒张率分别为（69.82±3.32）%，（52.7±3.33）%，（58.65±1.63）%和（63.10±1.53）%，对硝普钠的最大舒张率分别为（86.36±2.95）%，（72.34±1.84）%，（79.26±3.31）%和（85.51±2.03）%，模型组分别与对照组和橙皮素低、高剂量组比较，舒张幅度下降，差异均有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。
4.急性给予橙皮素对大鼠肾内动脉具有浓度依赖性舒张作用，抑制剂实验结果表明，Kv通道抑制剂4-AP（1mmol·L-1）预孵后，橙皮素对模型组大鼠肾内动脉舒张作用无明显变化，对对照组大鼠肾内动脉舒张作用显著减弱，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）；而BaCl2、TEA、Gli预孵后均没有明显影响橙皮素对肾内动脉的舒张作用，差异无统计学意义（P＞0.05）。
5.Westernblot结果表明，与对照组相比，模型组大鼠肾内动脉平滑肌细胞Kv1.2蛋白表达显著减少，差异有统计学意义（P＜0.01），Kv1.5、Kir2.1与Kir6.1蛋白表达无显著变化（P＞0.05）。与模型组相比，橙皮素低、高剂量组可分别使糖尿病大鼠肾内动脉平滑肌细胞Kv1.2蛋白表达水平上调，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01），Kv1.5、Kir2.1与Kir6.1蛋白表达水平无显著变化（P＞0.05）。糖尿病显著减弱肾内动脉平滑肌细胞Kv1.2蛋白表达，橙皮素可改善糖尿病大鼠肾内动脉平滑肌细胞Kv1.2蛋白表达。
结论：
1.橙皮素改善糖尿病大鼠肾功能损伤。
2.橙皮素改善糖尿病大鼠肾内动脉的肌原性反应。
3.橙皮素改善糖尿病大鼠肾内动脉肌原性反应的机制可能与其改善糖尿病大鼠肾内动脉平滑肌细胞Kv通道有关。
观察橙皮素(hesperetin，HSP)对糖尿病大鼠肾功能和肾内动脉(ratintrarenalartery，RIA)肌原性反应的改善作用，并探讨其改善肌原性反应的作用机制。
方法：
1.将40只健康雄性SD大鼠随机分为4组(每组10只)：对照组，模型组，橙皮素低、高剂量组。除对照组外，其余各组大鼠腹腔注射链脲霉素(streptozocin，STZ)65mg·kg-1建立大鼠糖尿病模型，血糖水平大于16.7mmol·L-1且持续1周以上认为大鼠糖尿病模型造模成功。橙皮素低、高剂量组于注射STZ2周后分别灌胃橙皮素50和100mg·kg-1·d-1，持续4周，对照组和模型组灌胃等量0.1%羧甲基纤维素钠溶剂。分别在给药前，给药4周后将大鼠放入代谢笼，收集24h尿液，用于测定尿肌酐(Ucr)、尿蛋白、尿糖；实验结束时，麻醉大鼠，主动脉采血，用于测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、一氧化氮(NO)。
2.采用微血管张力法测定肾内动脉血管张力，观察橙皮素对糖尿病大鼠血管肌原性反应的影响。大鼠麻醉处死后，立刻打开腹腔取出肾脏，置于盛有4℃、pH7.4且用95%O2+5%CO2混合气体饱和的PSS溶液中，显微镜下仔细分离出大鼠肾内动脉，剪取直径为200-240μm、长度约为2mm的血管环，将其固定于DMT浴槽内张力换能器上，Chart7.3生物信号采集软件记录其张力变化。分别取4组大鼠的肾内动脉血管环，向悬挂有四组血管环的浴槽内分别累加苯肾上腺素（Phenylephrine，PE）（0.01，0.1，1，10，100μmol·L-1）、氯化钾（Potassiumchloride，KCl）（20，40，60，80，100mmol·L-1），引起血管环收缩，以对照组最大收缩幅度为100%，计算收缩百分比。向浴槽内分别加入PE（10μmol·L-1）、KCl（60mmol·L-1），当收缩达到坪台后向浴槽内累积加入乙酰胆碱（0.0001，0.001，0.01，0.1，1，10μmol·L-1）或硝普钠（0.01，0.1，1，10，100μmol·L-1），以最大收缩幅度为100%，建立浓度-舒张曲线。
3.通过抑制剂实验观察钾通道抑制剂对橙皮素舒张作用的影响。当对照组，模型组大鼠肾内动脉血管环对PE（10μmol·L-1）或KCl（60mmol·L-1）收缩反应达坪台时向浴槽内累积加橙皮素（10，30，60，100μmol·L-1），建立浓度-舒张曲线。选择最适舒张浓度，在加入橙皮素（30μmol·L-1）前10min分别加入Kv抑制剂4-AP（1mmol·L-1）、Kir抑制剂BaCl2（1mmol·L-1）、KCa抑制剂TEA（1mmol·L-1）、KATP抑制剂Gli（0.01mmol·L-1）观察抑制剂对橙皮素舒张作用的影响。以加入钾通道抑制剂后血管环收缩达坪台期收缩幅度为100%，计算橙皮素的舒张百分比。
4.Westernblot测定各组肾内动脉平滑肌细胞(ratintrarenalarterysmoothmusclecell，RIASMCs)Kv1.2，Kv1.5、Kir2.1与Kir6.1表达水平。
结果：
1.橙皮素改善糖尿病大鼠的肾功能。与对照组大鼠相比，模型组体重显著降低，给予橙皮素治疗后对糖尿病大鼠的体重减低有一定改善作用（P＜0.05）；模型组大鼠的血糖、总胆固醇、甘油三酯、饮水量、尿量水平显著升高（P＜0.01，P＜0.001），给予橙皮素治疗后对糖尿病大鼠的上述指标均有一定改善作用(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001)；实验结束时，模型组大鼠的血肌酐、尿素氮、尿蛋白、尿肌酐、尿糖水平显著升高（P＜0.01，P＜0.001），肾功能出现异常，给予橙皮素治疗后对糖尿病大鼠肾功能有改善作用（P＜0.05）；模型组大鼠的一氧化氮水平与对照组相比显著降低（P＜0.001），给予橙皮素治疗后对糖尿病大鼠一氧化氮水平有改善作用(P＜0.01，P＜0.001)。
2.橙皮素改善糖尿病大鼠肾内动脉的收缩功能。PE（0.01，0.1，1，10，100μmol·L-1）收缩各组大鼠肾内动脉，模型组和橙皮素低、高剂量组最大收缩率分别为（147.14±3.81）%，（124.18±3.23）%，（107.28±0.78）%，模型组分别与对照组和橙皮素低、高剂量组比较，收缩幅度升高，差异均有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）；KCl（20，40，60，80，100mmol·L-1）收缩各组大鼠肾内动脉，其最大收缩率分别为（174.66±4.83）%，（137.73±3.47）%，（106.97±3.14）%，模型组分别与对照组和橙皮素低、高剂量组比较，收缩幅度升高，差异均有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。
3.橙皮素改善糖尿病大鼠肾内动脉的舒张功能，乙酰胆碱或硝普钠对PE、KCl预收缩有浓度依赖性的舒张作用。结果表明，PE预收缩时，对照组、模型组和橙皮素低、高剂量组肾内动脉对乙酰胆碱的最大舒张率分别为（71.29±4.92）%，（51.5±4.96）%，（58.28±1.85）%和（65.29±2.29）%，对硝普钠的最大舒张率分别为（83.28±0.96）%，（71.11±1.42）%，（75.43±1.99）%和（78.98±1.10）%，模型组分别与对照组和橙皮素低、高剂量组比较，舒张幅度下降，差异均有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）；KCl预收缩时，各组肾内动脉对乙酰胆碱的最大舒张率分别为（69.82±3.32）%，（52.7±3.33）%，（58.65±1.63）%和（63.10±1.53）%，对硝普钠的最大舒张率分别为（86.36±2.95）%，（72.34±1.84）%，（79.26±3.31）%和（85.51±2.03）%，模型组分别与对照组和橙皮素低、高剂量组比较，舒张幅度下降，差异均有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。
4.急性给予橙皮素对大鼠肾内动脉具有浓度依赖性舒张作用，抑制剂实验结果表明，Kv通道抑制剂4-AP（1mmol·L-1）预孵后，橙皮素对模型组大鼠肾内动脉舒张作用无明显变化，对对照组大鼠肾内动脉舒张作用显著减弱，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）；而BaCl2、TEA、Gli预孵后均没有明显影响橙皮素对肾内动脉的舒张作用，差异无统计学意义（P＞0.05）。
5.Westernblot结果表明，与对照组相比，模型组大鼠肾内动脉平滑肌细胞Kv1.2蛋白表达显著减少，差异有统计学意义（P＜0.01），Kv1.5、Kir2.1与Kir6.1蛋白表达无显著变化（P＞0.05）。与模型组相比，橙皮素低、高剂量组可分别使糖尿病大鼠肾内动脉平滑肌细胞Kv1.2蛋白表达水平上调，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01），Kv1.5、Kir2.1与Kir6.1蛋白表达水平无显著变化（P＞0.05）。糖尿病显著减弱肾内动脉平滑肌细胞Kv1.2蛋白表达，橙皮素可改善糖尿病大鼠肾内动脉平滑肌细胞Kv1.2蛋白表达。
结论：
1.橙皮素改善糖尿病大鼠肾功能损伤。
2.橙皮素改善糖尿病大鼠肾内动脉的肌原性反应。
3.橙皮素改善糖尿病大鼠肾内动脉肌原性反应的机制可能与其改善糖尿病大鼠肾内动脉平滑肌细胞Kv通道有关。