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多环芳烃由于其具有毒性、致突变性和致癌性,易对环境和人类都具有很大的危害性。环境激素导致人类精子数目下降、损害动物生殖机能同时还导致睾丸癌和生殖系统肿瘤增加。雌激素及衍生物为主的类固醇激素是环境激素的一种,因此两者引起了世界及越来越多科学工作者的关注。漆酶对多种污染底物具有降解作用,已有许多关于植物、细菌、白腐真菌产漆酶的研究,漆酶可用于降解多种多环芳烃和类固醇激素。鉴于用产漆酶的非白腐真菌降解蒽和类固醇激素较少被报道,本文以课题组保存的FusariumsolaniMAS2为研究对象,探究其对多种的单环芳烃、类固醇激素和多环芳烃的降解能力,以及漆酶基因的克隆表达。主要结果如下: 1、菌株F.solaniMAS2能够降解多种单环芳烃、多环芳烃和类固醇激素。菌株对蒽和类固醇激素有很好的降解效果,尤其是较难被降解的17β-乙炔基雌二醇(EE2)。 2、将单因素分析及响应面试验设计,应用于降解蒽及产漆酶的的研究。在单因素试验的基础上,采用响应面分析法建立蒽降解效率和产漆酶效率的二次多项数学模型,并验证了模型的有效性。分析不同培养环境对降解蒽的影响,单因素试验表明,在以下环境中降解蒽的效果较佳:蒽的初始浓度50mg/L、培养时间为30天、NaCl9g/L、pH7.5、(NH4)2SO41.5g/L、接种3个菌块。为了确定产漆酶菌株最佳的发酵条件,通过Box-Behnken法设计了响应面实验对培养基中的温度、pH和蒽的初始浓度进行了产漆酶优化,获得较佳的培养条件20℃、pH6.5and30mgl-1,漆酶的产量比原来的(25℃,pH5.5and50mgl-1,0.52Umgprotein-1/4.11Uml-1)增加了38.9倍。 3、通过生物量、产酶量和降解率分析F.solaniMAS2降解四种类固醇激素的降解能力,同时对降解EE2的培养环境进行探究。单因素试验表明,以下培养条件有较好的降解效果:NaCl24g/L、pH7.5、MgCl2·6H2O2.5g/L、(NH4)2SO42g/L、K2HPO4·3H2O3g/L、接种3个菌块。 4、从F.solaniMAS2克隆获得的漆酶基因,构建原核表达质粒Lac-pET32a1将其转入大肠杆菌Rosetta,得到重组菌株Lac-pET32a1-R,过量表达。构建真核表达质粒LAC-pPICαA和LAC-pPIC9k,得到重组酵母菌LAC-pPICαA-X33和LAC-pPICαA-SMD1168。