论文部分内容阅读
目的LPS是位于G-菌外膜中的脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）亦称内毒素,它是G-菌诱发细胞损伤与凋亡的主要物质。越来越多的研究显示LPS与病理妊娠有着密切的关系。很多研究表明,LPS可通过不同的信号传导通路引起巨噬细胞、肺泡上皮细胞等细胞的过度凋亡。还有研究发现,子痫前期、胎儿生长受限、流产、过期妊娠等病理妊娠时存在胎盘滋养细胞的过度凋亡。那么,LPS是否可以通过诱导滋养细胞过度凋亡参与各种病理妊娠的发病呢?本实验拟通过研究不同浓度LPS对体外培养的滋养细胞系JEG-3凋亡的影响,探讨LPS在病理妊娠发病中的作用。实验材料与方法一、材料滋养细胞系JEG-3（购自中科院动物所,接种于含10%小牛血清,100u/ml青霉素及100u/ml链霉素的FD培养液中,于37℃,5%CO2条件下进行培养,实验时取对数生长期细胞）。二、方法1、实验分组和处理因素:对照组:不加LPS,进行常规的细胞培养和传代。实验组:接种细胞24h进入对数生长期后,将细胞加入六孔板中,将Ⅰ型胶原处理好的盖玻片置于六孔板内,待细胞爬满盖玻片80%后,分别在培养液中加不同剂量的LPS,使其终浓度分别为25、50、100ng/ml,培养24h后,收集细胞备测。2、细胞凋亡的形态学分析和凋亡率检测:将LPS处理后的待测细胞进行染色,分别在荧光显微镜和透射电镜下观察细胞形态,同时应用流式细胞仪进行细胞滋养细胞凋亡率的测定。三、统计学分析所有数据均以均数±标准差（x±s）表示,应用SPSS 12.0软件对数据进行方差分析检验。当P＜0.05时,有统计学意义。实验结果一、细胞凋亡的形态学观察在荧光显微镜下观察到对照组细胞滋养细胞核较大,染色质分布均匀,经LPS（25ng/ml）作用的实验组细胞滋养细胞可见凋亡小体等典型的细胞凋亡形态。透射电镜观察到凋亡细胞的超微结构。二、Annexin v-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率检测结果发现,随着LPS浓度的升高,其引起JEG-3细胞凋亡的数量呈现出上升趋势,对照组（浓度为0）细胞凋亡率（0.81±0.15）%,实验组（LPS终浓度分别是25、50、100ng/ml）的凋亡率分别是（2.06±0.33）%、（7.44±0.68）%、（13.44±0.90）%。结论LPS能够诱导CTB过度凋亡,且随着LPS浓度的增加CTB凋亡率明显增加,呈剂量依赖关系,CTB过度凋亡与LPS的浓度密切相关。