梅花鹿卵泡刺激素原核表达研究

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卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)广泛用于牛、羊、猪等动物的超排、人工受精等繁殖育种工作中。可通过多种方法获得FSH,但是由动物脑垂体中提取的FSH存在较多问题,如材料来源有限、提取纯化工作费时、费力、质量差、纯度低、常有其它激素的污染等。而采用基因重组技术可大量生产高纯度的FSH,降低生产费用,这对畜牧业生产具有重要意义。   本文在导师关洪斌研究的基础上,进一步研究了梅花鹿FSHα/β两亚基基因的克隆和融合表达。   本实验首先以原构建的克隆载体为模板,设计引入限制性内切酶EcoR I和Xho I酶切位点的引物,对梅花鹿FSHα/β两亚基基因分别进行PCR扩增,然后将纯化回收的PCR产物与pMD18-T载体连接后,转化JM109感受态菌,通过Xho I和EcoRI双酶切后插入表达载体pGEX-6P-2,重组质粒,将阳性克隆导入Ecoli BL21,IPTG诱导表达GST-FSHα/β融合蛋白,最后使用SDS-PAGE进行分析鉴定。   本实验最终成功克隆了FSHα亚基基因,PCR产物大小约370 bp,测序结果与GenBank序列一致,成功构建了重组表达载体pGEX-6P-2-FSHa,由IPTG诱导表达的融合蛋白经SDS-PAGE分析,在相对分子量39.3kD处,出现特异性蛋白条带;FSHβ亚基基因PCR产物大小约400bp,测序结果与GenBank序列一致,成功构建了重组表达载体pGEX-6P-2-FSHβ,由IPTG诱导表达的融合蛋白经SDS-PAGE分析,在相对分子量39.5 kD处,出现特异性蛋白条带。上述结果说明在Ecoli BL21中成功表达了梅花鹿FSHa/β-GST融合蛋白。
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