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目的:分别经大脑、内耳、腹腔3个不同部位接种小鼠巨细胞病毒(murinecytomegalovirus,MCMV),建立MCMV感染一听力损伤的BALB/C小鼠动物模型,同时应用更昔洛韦(ganciclovir,GCV)干预,通过脑干听觉诱发电位(auditorybrainstem response,ABR)和内耳前庭、蜗管相关结构免疫炎症病理变化的比较,以明确哪种感染方式建立动物模型能够引起相对较明显的听力损伤及内耳病理变化,为今后巨细胞病毒感染-听力损伤发病机制及新的治疗药物的研究提供理想的研究平台。
方法:新生BALB/C小鼠根据MCMV接种部位的不同,按窝随机分为脑内组、内耳组(均取左侧耳为接种操作耳)、腹腔组3组,其中每组平行设正常对照组(接种部位注射10μl无菌NS)、病毒组(接种部位注射TCID50为104.31/0.1ml的MCMV病毒悬液10μl)、治疗组3个亚组(MCMV接种方法同病毒组,接种MCMV后第2d天始,腹腔注射GCV60mg/kg.d,连用2w),每组8只(内耳组中的各个亚组每组16只)。GCV治疗2w后,在声电屏蔽下检测小鼠ABR,然后将小鼠断头处死,取出两侧听泡,分别提取MCMV-DNA、石蜡切片后,行PCR分析和组织病理学观察。
结果:
1.经脑内接种MCMV病毒组小鼠,内耳MCMV-DNA PCR电泳均出现阳性条带;经内耳接种MCMV病毒组小鼠接种MCMV耳内耳异亦出现阳性条带,而对侧耳未见阳性结果;经腹腔接种MCMV病毒组小鼠亦未见阳性结果。另外,经脑内、内耳接种MCMV治疗组内耳(内耳接种途径为接种MCMV耳)阳性条带亮度与病毒组相比变弱。
2.经脑内接种MCMV病毒组、经内耳接种MCMV病毒组(接种MCMV耳)小鼠与正常对照组相比,ABRⅠ波潜伏期延长、波幅降低(P＜0.05),差异存在统计学意义,而内耳接种方式接种MCMV耳对侧耳(P＞0.05),差异无统计学意义;经腹腔接种MCMV病毒组与正常对照组相比(P＞0.05),差异无统计学意义。另外,经脑内、内耳接种MCMV治疗组(内耳接种途径为接种MCMV耳)与病毒组相比,ABRⅠ波潜伏期缩短、波幅升高(P＜0.05),差异存在统计学意义。
3.经脑内接种MCMV病毒组、经内耳接种MCMV病毒组(接种MCMV耳)小鼠与正常对照组相比,内耳前庭膜明显增厚伴有较多的淋巴细胞浸润、蜗管顶部分泌表皮层纤维化改变明显,而内耳接种方式接种MCMV耳对侧耳前庭膜与蜗管未出现上述病理变化;经腹腔接种MCMV病毒组与正常对照组相比,亦未出现上述类似的前庭膜与蜗管的病理变化。另外,经脑内、内耳接种MCMV治疗组(内耳接种途径为接种MCMV耳)与病毒组相比,前庭膜与蜗管亦无上述明显组织病理改变。
结论:
1.脑内接种MCMV可引起双侧内耳MCMV感染并诱发炎症反应。
2.脑内接种MCMV可导致双侧耳明显的听力损伤。
3.GCV可通过抑制内耳CMV复制从而减轻其对内耳的损害,而对听力损伤的恶化起到一定的治疗作用。
即:脑内接种方式可作为MCMV感染听力损伤尤其是内耳损伤机制研究以及新的治疗药物研发的一种动物模型的建立方法。