研究目的:研究探讨PDK1/AKT对于破骨细胞分化过程中的作用,为了解破骨细胞分化具体机制的研究提供理论基础。研究方法:选用RAW264.7单核巨噬细胞为研究对象,采用两种方式进行细胞培养:普通培养和加入50ng/ml巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和100ng/ml核因子Kβ受体活化因子配体(RANKL)诱导分化培养。(1)培养第4天,TRAP特异性染色和免疫荧光染色对成熟破骨细胞鉴定,检测普通培养和诱导分化培养细胞内p-AKT蛋白表达变化。(2)在诱导分化过程中加入AKT抑制剂或PDK1抑制剂进行实验干预。分别于干预第2天和第4天,对细胞内DC-STAMP和NFATc1 mRNA相对表达量进行检测;干预第4天,通过TRAP特异性染色中面积≥2000μm~2的阳性细胞计数并比较,并检测细胞内DC-STAMP蛋白表达变化情况。研究结果:(1)50ng/ml巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和100ng/ml核因子Kβ受体活化因子配体(RANKL)可诱导分化出成熟破骨细胞,在此过程中p-AKT蛋白表达受到抑制。(2)加入AKT抑制剂或PDK1抑制剂可以诱导分化出更多大面积成熟破骨细胞。(3)在抑制剂的干预下,细胞内DC-STAMP蛋白和DC-STAMP mRNA表达有着显著性的上升。(4)在抑制剂的干预下,细胞内NFATc1 mRNA表达受到影响。研究结论:(1)PDK1/AKT参与破骨细胞分化过程;(2)PDK1/AKT抑制破骨细胞分化;(3)PDK1/AKT调控DC-STAMP抑制破骨细胞分化;(4)NFATc1参与PDK1/AKT影响破骨细胞分化过程;