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目的:探讨微RNA-146a(miR-146a)调控乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)复制的分子机制。方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测miR-146a在HepG2细胞系和HBV稳定复制细胞系HepG2.2.15中的表达水平差异。在 HepG2.2.15 细胞中分别转染 miR-146a mimic 和 miR-146a inhibitor 48小时(h)后,采用qRT-PCR及蛋白免疫印迹法(western blot)检测HBV-DNA及结构特异性核酸内切酶(Flap endonuclease 1,FEN1)的表达水平,并进一步外源性转入FEN1质粒48h后检测HBV-DNA载量(copies)及miR-146a水平。利用生物信息学软件筛选分析miR-146a的下游潜在靶基因白介素-1受体相关激酶1抗体/肿瘤坏死因子受体相关因子6(IRAK1/TRAF6),在 HepG2.2.15 细胞中分别转染 miR-146a mimic 和miR-146a inhibitor 48h 后,采用 qRT-PCR 技术检测 IRAK1/TRAF6 的表达水平。在 HepG2.2.15 细胞中,再分别转染 miR-146a mimic 及 Argonaute2蛋白(Ago2)siRNA 48h 后,western blot和qRT-PCR技术检测Ago2蛋白水平;Ago2 RIP(RNABinding ProteinImmunoprecipitation;RNA 结合蛋白免疫沉淀技术)后,qRT-PCR检测miR-146a的表达水平;Ago2 siRNA后转染miR-146a mimic,检测FEN1及HBV-DNA的表达水平。结果:miR-146a在HepG2.2.15细胞中相对表达量(11.755±0.069)较 HepG2 组(1.000±0.038)明显升高(P<0.05)。在 HepG2.2.15 细胞中转染 miR-146a mimic 及 miR-146a inhibitor 48h 后,miR-146a 相对表达水平(1.487±0.243)、(0.019±0.004)较对照组(1.001±0.047)升高和降低,差异有统计学意义(P<0.05),HBV-DNA载量(copies)分别为(3.215±0.001)、(2.623±0.083),较对照组(2.813±0.015)升高及降低(P<0.05)。在HepG2.2.15细胞中转染miR-1463 mimic、miR-146a inhibitor后,FEN1相对表达水平分别为(1.678±0.131)、(0.344±0.045)较对照组(1.017±0.194)明显升高及降低(P<0.05)。在HepG2.2.15细胞中转染FEN1质粒后,miR-146a相对表达水平(5.712±0.371)较对照组(1.023±0.224)明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),HBV-DNA载量(copies)为(3.431±0.004)较对照组(2.661±0.009)明显升高(P<0.05)。在 HepG2.2.15 细胞中转染 miR-146a mimic、miR-146a inhibitor 后,采用qRT-PCR技术检测结果显示,IRAK1/TRAF6相对表达水平分别为(0.114±0.013)、(0.390±0.014)、(1.222±0.073)、(2.145±0.271)较对照组(1.000±0.038)、(1.007±0.119)明显降低及升高(P<0.05)。在HepG2.2.15细胞中转染 Ago2 siRNA,Ago2 siRNA 组 Ago2 相对表达量(0.688±0.099)较对照组(1.002±0.069)降低,差异有统计学意义(P<0.05),采用RIP技术检测结果显示,Ago2 siRNA组miR-146a相对表达水平(0.105±0.002)较对照组(1.000±0.041)明显降低(P<0.05),Ago2 siRNA 后转染 miR-146a mimic,FEN1 相对表达水平(0.485±0.100)较对照组(1.000±0.023)明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),HBV-DNA载量(copies)为(3.230±0.047)较对照组(3.789±0.041)明显降低(P<0.05)。结论:Ago2协同miR-146a通过下游靶基因IRAK1/TRAF6调控FEN1蛋白基因的转录而促进HBV复制。