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目的:分离卡铂耐药型人卵巢癌类干细胞，为研发和筛选针对卡铂耐药的卵巢癌的二线治疗药物提供细胞模型。 研究方法:1.无血清悬浮培养人卵巢癌类干细胞球:(1)卵巢癌细胞原代培养:将收集的卵巢癌患者的组织或腹腔积液经处理后，获取单细胞悬液，再用含血清培养基进行原代培养;(2)富集卵巢癌类干细胞球:待卵巢癌原代细胞生长状态良好，且长满至瓶底80％时，经消化、离心、计数后，用无血清培养基重悬细胞，接种在超低吸附皿中;(3)建立耐药型卵巢癌类干细胞模型:卵巢癌原代细胞经卡铂化疗药诱导72小时，采用无血清悬浮培养，富集纯化卵巢癌类干细胞球。 2.鉴定卵巢癌类干细胞球:(1)通过细胞免疫荧光检测干细胞标记物的表达(2)通过流式细胞术检测卵巢癌贴壁细胞，卵巢癌类干细胞球及经卡铂化疗药物诱导后的卵巢癌类干细胞球中干细胞表面标记物的表达情况。 结果:1.卵巢癌患者的组织和腹腔积液通过无血清悬浮培养模型能够形成卵巢癌类干细胞球。2.腹腔积液培养的卵巢癌细胞，经卡铂诱导后无血清培养，进一步纯化富集卵巢癌类干细胞球。3.通过免疫荧光法检测干细胞标记物，从荧光显色来看卵巢癌细胞球中CD133，ALDH1，ABCG2抗原的表达量多于卵巢癌原代细胞;从形态学上看，干细胞所呈现的荧光染色表现出明显的球状生长。4.通过流式细胞仪检测卡铂短期诱导分离的卵巢癌类干细胞球中CD24+细胞含量明显增加。 结论:1.与肿瘤组织相比，经腹水培养的原代卵巢癌细胞更容易形成卵巢癌类干细胞球;2.原代培养的卵巢癌细胞经卡铂化疗药物短期诱导后无血清培养，可进一步富集纯化卵巢癌类干细胞球，可作为卵巢癌耐药研究的理想细胞模型。