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背景与目的研究表明,肿瘤微环境中的肿瘤细胞源性微粒(Tumor-derived microparticles,TMPs)作为一种细胞间通讯的介质,参与了肿瘤的发生发展过程。本研究通过梯度差速离心的方法分离提取肝癌H22细胞微粒(H22 cell-derived microparticles,HMPs),建立肝癌实验动物模型,研究H22细胞微粒对肝癌生长的影响。并且用肝素和Dynasore干预H22细胞微粒与肝癌H22细胞的相互作用,进一步研究H22细胞微粒对肝癌生长的影响。方法1.将经BALB/c小鼠腹腔传代培养的肝癌H22细胞,采用悬浮细胞离心甩片处理、HE染色,光镜下对细胞形态进行观察。2.将经小鼠腹腔稳定培养3代的H22细胞体外无血清诱导48h,通过梯度差速离心的方法分离提取肝癌H22细胞微粒,采用透射电镜对其形态进行观察,流式细胞术检测微粒的大小、数量和其分子表型,以及利用Bradford法对其进行蛋白定量。3.将H22细胞与不同剂量的微粒共孵育后接种于BALB/c小鼠皮下,观察不同的剂量对小鼠皮下移植瘤生长的作用。4.选择某一有作用的剂量进行肝素(Heparin)和Dynasore的干预处理,进一步研究肝癌H22细胞微粒对肝癌生长的影响。结果1.本实验通过梯度差速离心的方法分离提取了H22细胞微粒,透射显微电镜结果显示,分离提取的H22细胞微粒为直径<1μm、大小不一、闭合的微囊泡。通过流式细胞术对其进行绝对计数和表面磷脂酰丝氨酸(PS)的检测,总共分离提取到1×107(约为6.7mg的蛋白当量)H22细胞微粒,足够用于本研究的在体实验,而且PS阳性的微粒比例为7.36%。2.H22细胞微粒高剂量组的移植瘤体积较PBS对照组和H22细胞微粒低剂量组的均大,差异具有统计学意义(P<0.05),其移植瘤瘤重也较PBS对照组和H22细胞微粒低剂量组重,差异具有统计学意义(P<0.05)。而H22细胞微粒中剂量组分别与高剂量组和低剂量组比较,其移植瘤的体积和瘤重均无统计学差异(P>0.05)。3.对于肝素干预组,结果显示,经肝素处理的H22细胞微粒与H22细胞共孵育组(Heparin-HMPs-H22组)的小鼠移植瘤的瘤重较未处理组(HMPs-H22组)的轻,差异有统计学意义(P<0.05)。同样,其移植瘤的体积也较HMPs-H22组的小,差异具有显著的统计学意义(P<0.01)。4.对于Dynasore干预组,结果显示,经Dynasore干预H22细胞微粒与H22细胞共孵育组(Dy-HMPs-H22组)的移植瘤体积较未处理组(HMPs-H22组)的小,差异具有统计学意义(P<0.05)。与HMPs-H22组比较,Dy-HMPs-H22组的移植瘤瘤重也较轻,具有统计学差异(P<0.05)。结论1.高剂量的H22细胞微粒可能通过促进小鼠肝癌移植瘤的生长,从而促进肿瘤体积与瘤重的增长;2.H22细胞微粒对小鼠肝癌移植瘤生长的促进作用可以被肝素和Dynasore抑制。