研究目的： 从2002年H3N2流感获得NA基因，构建入pCI—neo载体，制备DNA疫苗，对进行序列分析，探讨其分子进化关系，为研究流感DNA疫苗奠定基础。 研究方法： 从2002年流行流感患者分离甲型流感病毒，鉴定病毒分离株，病毒经9~11龄的鸡胚和MDCK细胞培养增殖，-70℃保存提取流感病毒RNA，设计引物进行NA基因RT-PCR，将特异性PCR产物克隆到T—vector，进行序列测定和分析。并将基因亚克隆到真核表达载体pCI—neo，利用生物信息学技术对H3N2型流感病毒的NA基因进行了同源性比较和进化分析。 研究结果： 鉴定病毒分离株为A/Guangdong/236/2002/H3N2，A/Guangdong/068/2002/H3N2，A/Guangdong/448/2002/H3N2，A/Guangdong/027/2002/H3N2.获得一个核苷酸长度为1410bp的基因编码469个氨基酸H3N2病毒NA基因，构建了真核表达载体，转染COS-7细胞。1968—1975年毒株与2000年后毒株变异较大，2000年之后毒株变异较小。NA基因776位点，本课题研究毒株2002广东株发生了独特的变异，由A→G。在1185位点，本课题研究毒株2002广东株和1998年广东株发生了独特的变异(A→G)，有地域特征。2000年以后毒株发生稳定变异的氨基酸位点有18，23，30，42，93，127，143，208，216，249，265，267，307，339，344，346，369，385，437。2004年以来的毒株199位由E突变回1988年以前毒株K，432位由Q突变回1984年以前毒株E。385位1992年以前毒抹为T，之后到2001年毒株突变为K，2002年以来毒株为N，对于毒株适应选择压力有重要意义。 结论： 1.由H3N2流感病毒株中得到了NA基因编码区cDNA序列，序列分析正确，成功构建了其真核表达载体，为进一步研究其免疫功能奠定了基础。 2.1968年以来中国H3N2流感病毒NA基因进化主要分为三个阶段，第一个阶段从1968年到20世纪90年代初，第二个阶段从20世纪90年代初到20世纪90年代中期，第三个阶段从20世纪90年代末到目前21世纪初期。基本上呈时间进化关系，地域差别不明显。90年代中期处于新旧毒株进化交替时期，每隔约9年有一次基因返祖现象。