肌肉生长抑制素(myostatin，MSTN)是Mcpherron等研究小鼠转化生长因子一p(TGF-β)超家族时发现的一种新的生长因子。该基因编码的蛋白质对骨骼肌有负调控作用，动物缺乏MSTN出现肌肉增大，骨骼肌肌群分布广，而且不增生成脂肪等现象。任何可以干扰MSTN基因表达或表达产物活性的措施，都可能影响肌肉的正常发育。利用真核表达系统表达真核基因，进而研究该基因的结构与功能是分子生物学技术也是基因工程的重要内容。 在本论文中，作者通过构建真核表达载体，并诱导其在鸡胚成纤维细胞(CEF)中表达。主要研究内容如下： 根据原实验结果中鸡MSTN基因序列，利用Primer Premier 5.0软件自行设计了一对引物，以本实验室提供的质粒为模版进行PCR扩增，扩增产物为1128kb。扩增产物经凝胶回收后被克隆到pMD18-T Simple Vector克隆载体中。从pMD18-MSTN-T重组质粒上切下目的片段，然后与用BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切处理过的真核表达载体pCDNA3.0进行连接，构建表达重组质粒pCDNA-MSTN-3.0，经PCR和双酶切鉴定其正确性，准备转染鸡胚成纤维细胞。制作鸡胚成纤维细胞(CEF)时选用9～12日龄的鸡胚，当CEF的数量达到培养瓶瓶底的75％时准备转染。将上述鉴定为阳性的表达重组质粒pCDNA-MSTN-3.0通过脂质体转染到鸡胚成纤维细胞中，在转染后18、24、30、36小时后，用胰酶消化，待全部贴壁的鸡胚成纤维细胞全部脱落下来时反复冻融收集上清液，然后进行SDS-PAGE电泳。结果表明在转染后18、24、30、36小时都有蛋白表达。从18h左右开始表达大约在30h表达量最大。 外源重组蛋白的成功表达为下一步制备目的蛋白的抗体做好了充分的准备，为进一步研究MSTN和MSTN基因的结构、功能以及该基因的遗传学本质等奠定了坚实的基础。