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目的:研究骨髓源性细胞在二甲基亚硝胺(DMN)肝纤维化小鼠肝内微血管新生中的作用及扶正化瘀方的影响。
方法：将绿色荧光蛋白(GFP)转基因小鼠的骨髓细胞经尾静脉移植给全身接受致死量γ射线照射的同品系小鼠体内,两个月后,受体动物分为对照组和造模组,造模组用DMN按每次10mg/kg体重腹腔注射制备肝纤维化模型,隔日一次,共四周。成模动物随机分为模型组、扶正化瘀319方组以及促肝细胞生长素(pHGF,商品名:威佳)组,319方组和pHGF组分别给予扶正化瘀319方流浸膏和促肝细胞生长素,对照组和模型组给予生理盐水。治疗用药4周后,测定肝功能(血清ALT、AST、Alb及T.Bil);Jamall氏法检测肝组织羟脯氨酸含量;放免法检测血清透明质酸(HA)含量;HE染色及天狼猩红染色观察肝组织炎症、坏死及纤维组织增生情况;透射电镜观察肝窦超微结构变化;vWF免疫组化检测肝窦内皮细胞表型改变情况;GFP荧光免疫组化及GFP/α-SMA、GFP/CD32荧光免疫组化双染检测骨髓源性细胞在肝脏的归巢和分化。
结果：(1)骨髓细胞移植两个月后,受体动物外周血中出现满视野GFP+细胞,DMN腹腔注射4周可形成显著肝纤维化。(2)与模型组比较,319方组和pHGF组肝功能(血清ALT、AST、Alb,P＜0.05)有所改善,血清HA含量及肝组织羟脯氨酸含量降低(P＜0.05),肝组织炎症、坏死及纤维组织增生减轻,vWF免疫组化染色减弱(P＜0.05),内皮失窗孔减少,基底膜变薄甚至消失。(3)对照组肝组织内偶见GFP+细胞,模型组肝组织内GFP+细胞增多,主要分布于纤维间隔区域,并且表达肌成纤维细胞标记物α-SMA。(4)与模型组比较,319方组肝组织GFP+细胞明显增加;pHGF组增加不明显。(5)319方组和pHGF组纤维间隔区GFP+/α-SMA+细胞数量均减少,肝实质内GFP+细胞以及GFP+/CD32+细胞数量增多,319方组作用更加明显。
结论：(1)骨髓源性细胞在DMN所致的肝纤维化过程中可分化为肌成纤维细胞,参与肝纤维化及肝窦毛细血管化的形成过程。(2)扶正化瘀319方具有抗实验性小鼠肝纤维化及肝窦毛细血管化的作用。(3)扶正化瘀319方抗肝纤维化及肝窦毛细血管化的作用机制可能与其抑制骨髓源性细胞向肌成纤维细胞分化有关。(4)扶正化瘀319方可促使骨髓源性细胞向肝实质内迁移,并诱导其定向分化为正常肝窦内皮细胞,重建肝窦结构。