豹蛙酶（Onconase，简称ONC）是一种从北极豹蛙卵母细胞和早期胚胎中提取的核糖核酸酶，属于RNase A超家族，研究证实其对许多肿瘤细胞和实体肿瘤都具有杀伤作用。以一株表达豹蛙酶的基因工程菌为研究对象，分别在摇瓶和3.7L小型发酵罐中对工程菌发酵工艺进行了优化，确定了接种量2％、IPTG浓度0.5mM、诱导时间3.5小时、发酵周期9h的工艺条件，结果于每升发酵液获得56.03g湿菌体，菌体内豹蛙酶表达量占胞内蛋白总量的30％以上。进一步对豹蛙酶的纯化工艺进行探索，建立了菌体破碎、包涵体洗涤、蛋白复性、蛋白纯化工艺，100g湿菌体得到18.64g包涵体，每升发酵液获得约300mg目的蛋白，HPLC检测纯度97.0％，对B16和K562细胞的细胞毒性IC50值为1.74μmol/L、0.218μmol/L。经检测，所得到的豹蛙酶在与斑蝥酸的联合作用中，发现两者在细胞水平上具有协同抑制SPC-A-1和A549肿瘤细胞株增殖的作用，拓展了豹蛙酶和斑蝥酸酸的用途，为肺癌治疗提供了新的线索。鉴于蝎氯毒素(Chlorotoxin，简称CTX)能够与分泌金属蛋白酶I（MMP2）的肿瘤细胞特异性相结合，为增强豹蛙酶的靶向性，本文将豹蛙酶与蝎氯毒素构建成融合蛋白(ONC-CTX)，并对工艺进行了研究，结果每升发酵液获得约15mg融合蛋白，验证了融合蛋白具有与蝎氯毒素相同的靶向性，并能杀伤肿瘤细胞，为研究其在体内抗肿瘤的效果奠定了基础。