研究背景随着技术的不断改进,毛发移植手术后移植毛囊的存活率和密度都有很大提高,大多数患者可以获得满意的术后效果。但是目前毛发移植仍然存在一些未解决的问题,其中最重要的问题就是大多数移植的毛囊需经历术后脱落期。通常,移植的毛囊大多由生长期进入退行期,随后进入静止期（此阶段即表现为毛发脱落）,需要6个月才能获得满意的外观。脱落期的出现极大地影响患者的满意度,是一个急需解决的问题。该现象的出现可能是由于三个原因:毛囊提取及移植过程的机械损伤,体外保存因素和移植后毛囊的血供重建（即缺血-再灌注,再神经支配等）。只有解决上述问题才能避免脱落期的出现。目前已有的毛发移植相关基础研究大多是用来源于头皮标本或者啮齿类动物触须的毛囊作为移植对象。动物实验使用的毛囊在手术后24小时内进行分离,毛囊分离和移植间隔时间往往超过20小时,甚至有些研究在毛囊分离后96小时才进行移植,这显著长于正常手术时间,导致移植物的存活率较低,因此不能完全模拟临床中毛发移植手术过程。尽管即刻移植的概念在几年前已有学者提出,该方法可以避免体外保存过程,减少体外保存过程对毛囊的损伤,但是它对于术后脱落期是否有影响,它与常规延迟移植的差异,以及相关的机制缺乏研究。据此,我们先以体外保存过程作为研究的突破口,通过对毛囊提取器获得的毛囊进行即刻移植,评价其对脱落期的影响,同时构建裸鼠体内毛囊移植模型模拟临床毛发移植手术过程,研究即刻移植和正常移植的毛囊之间存活过程的差异,探讨脱落期出现的机制,为临床工作提供一定的理论指导,同时希望为雄激素性脱发治疗提供新的思路。目的:1.明确保存过程对人毛发移植术后移植毛囊脱落期的影响2.构建裸鼠体内毛囊移植模型并对其效果进行评价3.通过裸鼠体内毛囊移植模型探讨毛囊移植术后脱落机制方法:1.即刻移植对人毛发移植术后脱落期的影响所需毛囊提取完毕后,将供区右侧提取的毛囊全部拔出,部分保存在0℃林格液中,部分保存在生理盐水中。患者先取右侧卧位进行即刻移植,一位医生将左侧供区的毛囊拔出,交于另一位医生即刻进行种植,种植于左侧受区。左侧种植结束后,嘱患者取平卧位,进行右侧受区毛囊的种植即进行常规毛囊移植步骤。术后拔取部分移植的毛囊进行后续检测,观察毛囊的生长情况。2.裸鼠体内毛囊移植模型的构建及评价用FUE技术获取患者后枕部完整毛囊,部分毛囊在裸鼠体内进行即刻移植,部分毛囊单位在0℃林格液中保存3小时后再进行移植。术后第0.5,1,2,3,5,7,9天分别对移植的毛囊进行取材并检测,部分裸鼠喂养至30天,评估术后毛囊的脱落率。3.毛囊移植术后毛囊脱落期出现的机制探讨将获取的后枕部完整毛囊在0℃林格液中保存3小时后再进行裸鼠体内移植。裸鼠随机分为对照组、巨噬细胞清除组和巨噬细胞增加组。对照组在移植术后每天注射磷酸盐缓冲液,巨噬细胞清除组在移植术后每隔一天注射一次含有脂质体的氯膦酸盐,巨噬细胞增加组则每天注射一次巨噬细胞集落刺激因子,各组均连续注射一周。术后第0.5,1,2,3,5,7,9天分别对移植的毛囊进行取材并检测,部分裸鼠喂养至30天,评估术后毛囊的脱落情况。结果:1.即刻移植对人毛囊移植术后脱落期的影响通过细胞的活死染色我们发现即刻提取的毛囊中仅有少量死细胞,而体外保存后的毛囊中死细胞数量增加,死细胞数量随保存时间的延长而逐渐增加,且生理盐水组中毛囊细胞死亡率明显高于林格氏液组。观察毛囊的死细胞分布,发现死细胞基本上位于毛囊的真皮鞘中,即刻提取的毛囊外周被大量纵向排列的胶原纤维所覆盖,排列整齐而密集,保存在林格氏液和生理盐水中的毛囊中的胶原纤维显得略微杂乱和稀疏。真皮鞘中间层中可以观察到一些破裂的纵向胶原纤维和横向胶原纤维。以上结果表明即刻移植有助于移植毛囊保持更好的形态。术后1个月常规移植组部分毛囊出现脱落。即刻移植组毛囊生长良好,无明显脱落,且毛干长度长于常规移植组。常规移植侧的部分毛囊在第3天出现退行期改变,即刻移植的毛囊血管化情况优于常规移植的毛囊,且炎症因子的浓度较低,凋亡细胞较少。2.裸鼠体内毛囊移植模型的构建及评价即刻移植的毛囊在第3天首次观察到血管化,常规移植的毛囊则在第5天观察到血管化。第5天部分常规移植的毛囊出现退行期改变,即刻移植组则在第7天。在常规移植的毛囊周围可见大量的中性粒细胞和巨噬细胞浸润,数量多于即刻移植组。在常规移植组中与毛囊周期相关的细胞因子,TNF-α、IL-1β和IL-1α的表达高于即刻移植组,而VEGF的表达则较即刻移植组低。毛囊移植术后1个月常规移植的大部分毛囊出现脱落,即刻移植组的裸鼠背部仍可见大量毛干。3.毛囊移植术后毛囊脱落期出现的机制探讨巨噬细胞清除组毛囊周围无明显巨噬细胞浸润,巨噬细胞增加组浸润的巨噬细胞数量较对照组明显增加,巨噬细胞增加组中M2型巨噬细胞比例低于对照组。巨噬细胞增加组和巨噬细胞清除组在第3天可观察到部分退行期毛囊,对照组在第5天才观察到退行期毛囊,且巨噬细胞增加组和巨噬细胞清除组在第5天呈退行期改变的毛囊多于对照组。巨噬细胞增加组在术后第3天观察到血管化,而对照组和巨噬细胞增加组第5天才在移植毛囊周围观察到明显的血管。巨噬细胞清除组则血管化较差。毛囊移植后的第2天和第3天,巨噬细胞清除组的VEGF低于对照组,而巨噬细胞增加组的VEGF表达水平明显高于对照组。巨噬细胞增加组中TNF-α,IL-1β和IL-1α的表达最高,巨噬细胞清除组中炎症因子表达水平一直较低,而对照组中炎症因子表达水平在移植后第二天达到顶峰,之后逐渐下降。在移植后30天,三组移植的毛囊大部分都已经脱落处于静止期,且巨噬细胞清除组和巨噬细胞增加组中脱落的毛囊多于对照组,而巨噬细胞清除组和巨噬细胞增加组之间毛囊脱落率无明显差别。结论:1.即刻移植的毛囊中细胞损伤小,移植后毛囊的血管化情况较好,虽然即刻移植不能完全解决脱落期的问题,但是该方法可以有效降低毛发移植术后移植毛囊脱落率。2.裸鼠体内人毛囊移植模型可以较好地模拟临床手术过程,后期可用于药物筛选或者其他与人毛囊相关的研究。3.适量巨噬细胞浸润可促进移植毛囊的血管化,有助于毛囊存活,但是局部浸润的巨噬细胞过多或者缺失均增加了毛囊移植术后脱落率。即刻移植降低毛囊脱落率的原因可能与即刻移植的毛囊损伤小、移植术后适量的巨噬细胞浸润有关。为了取得更好的手术效果,我们应减少毛囊损伤,尽早将毛囊移植到受区,用合适方法促进毛囊的血管化,同时控制受区的炎症。