Sonic hedgehog（Shh）是Hedgehog基因家族中重要的信号传导分子之一,在个体早期胚胎调控细胞增殖和分化过程中发挥着重要作用。本研究以翘嘴鳜（Siniperca chuatsi）为研究对象,探究了Shh基因对骨骼肌生长发育的调控作用。我们对翘嘴鳜Shh基因ORF区序列进行克隆,并利用生物信息学方法分析了Shh基因编码的蛋白质及同源进化特征;采用实时荧光定量及整胚原位杂交技术探究Shh基因在翘嘴鳜胚胎及幼鱼中的时空表达规律。进而,通过基因抑制和过表达处理后,采用石蜡切片HE染色、免疫荧光以及整胚原位杂交技术初步探究分析了Shh基因对翘嘴鳜骨骼肌发育分化的调控作用。获得的主要研究结果如下:1.采用生物信息学技术方法对翘嘴鳜Shh基因编码的蛋白质和同源进化特征进行了分析。该基因编码的蛋白具有2个功能结构域,即Hh-N与Hh-C。Hh-N结构域具有Hh蛋白的信号活性,Hh-C的功能则是起到类似胆固醇转移酶类作用,影响信号分子的分布。序列同源进化分析结果表明,翘嘴鳜Shh蛋白与自身所属的鲈形目鱼类Shh蛋白同源性较高。此外,Hh-N结构域的氨基酸序列在不同物种之间较为保守。2.采用实时荧光定量和整胚原位杂交技术分析阐明了翘嘴鳜Shh基因时空表达特征和规律。实时荧光定量结果显示,Shh在胚胎发育阶段的初期表达水平相对较低,在神经胚期表达显著上调,胚胎发育中后阶段较高水平表达,并在出膜期时表达量达到峰值。在出膜后1-7 d的稚鱼中,从1 d至4 d的表达量逐渐降低,且具有显著性（P＜0.05）。同时检测了Shh在幼体翘嘴鳜不同组织中的表达水平,Shh在不同组织中存在一定的表达差异,在脑、肠道中所检测的表达量较高,在红肌、白肌、脾脏、肝脏、肾脏和心脏中表达量较低。采用整胚原位杂交技术分析揭示,在翘嘴鳜胚胎中,Shh表达位置主要在脊索中胚层和脑部的丘脑部位。Shh信号通路内受体Ptch基因在体节、神经管和脑部表达。因此,推测在翘嘴鳜发育进程中Shh信号分子可能对肌肉发育具有调控作用。3.通过采用Shh信号抑制剂-环巴胺对翘嘴鳜胚胎和幼鱼进行处理,以及在胚胎中进行Shh过表达,初步揭示了Shh对肌细胞生长发育的调控作用。研究结果表明,采用环巴胺浸泡胚胎以及幼鱼肌肉注射处理,通过抑制Shh信号分子传导后,翘嘴鳜胚胎发育受阻,躯干尾端呈弯曲状,致畸率100%;胚胎原位杂交结果显示,Ptch、Myod、Mrf5基因表达受到不同程度抑制;幼鱼骨骼肌HE切片结果显示,肌纤维之间的间隙增大,横截面积减小,进而采用透射电镜显示,肌纤维粗细不均匀,部分肌纤维出现断裂、不连续,且呈退行性改变。采用免疫荧光分析发现,Pax7阳性细胞的平均数量及Brd U阳性细胞数量明显降低。同时,对与肌细胞生长分化相关的转录因子,生肌调节因子和肌肉结构基因表达分析揭示,经Shh信号分子被抑制后,几乎所测与肌细胞分化发育相关的因子的表达均显著降低。Shh过表达后,除Mylk和Myh2基因外,其余所检测基因表达均显著上升。根据以上结果推测Shh参与调控翘嘴鳜肌细胞的早期发育分化过程。