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目的:复制氯化镉（CdCl2）诱导的Saos-2人成骨细胞病理损伤模型,证明狭鳕鱼皮胶原蛋白肽（CP）经CaMKK/AMPK/Runx2信号通路对成骨细胞的保护作用;建立高效液相色谱法（HPLC）检测细胞内Pro-Hyp和Gly-Pro-Hyp的方法,确认小分子肽的含量。方法:CCK-8法筛选CdCl2造模浓度并检测CP作用于Sao-2细胞24 h细胞存活率;LDH法检测CP作用Saos-2的细胞毒性;RT-PCR技术测定CdCl2对Saos-2细胞的经时变化;应用RT-PCR和Western-Blot确定AMPK磷酸化水平（p-AMPK）以及CaM KK、AMPK、Runx2在mRNA和蛋白水平的表达,并运用特异性抑制剂、脂质体转染技术证明其级联关系;建立HPLC法检测细胞内液中Pro-Hyp、Gly-Pro-Hyp含量;SPSS22.0软件对数据进行统计分析。结果:LDH检测显示200,300,400,500,600或700μg/m L CP孵育24 h,600μg/m L出现细胞毒性（p<0.05）;CCK-8结果显示,2μM的CdCl2作用24 h成功复制Saos-2细胞损伤模型,浓度为0.5,1,2,5μM时,细胞存活率显著下降（p<0.05）,而加入125,250,500μg/m L CP预保护24 h,细胞存活率呈剂量依赖性升高（p<0.05）;CdCl2作用6,12,24,48 h CaMKK mRNA表达量呈时间依赖性升高,而AMPK不变,Runx2呈下降趋势（p<0.05）。CdCl2组CaMKK mRNA和蛋白水平较正常组升高（p<0.05）,AMPK mRNA水平不变,p-AMPK/AMPK蛋白水平、Runx2 mRNA和蛋白水平较正常组均降低（p<0.05）,提示CaMKK与细胞增殖呈负相关,p-AMPK/AMPK、Runx2与细胞增殖呈正相关。CP组CaMKK mR NA和蛋白水平较CdCl2组下降（p<0.05）,p-AMPK/AMPK蛋白水平、Runx2 mRN A和蛋白水平较正常组均升高（p<0.05）,提示CP可通过下调CaMKK,上调AMP K、Runx2促进Saos-2细胞增殖。经si-CaMKK/STO-609处理,CdCl2组中CaMKK表达沉默/下降,p-AMPK蛋白表达较正常组明显升高（p<0.05）,提示CaMKK负调控p-AMPK;CP组中p-AMPK蛋白表达较CdCl2组升高（p<0.05）,提示CP可通过抑制CaMKK上调AMPK。经si-AMPK/Compound C处理后,CdCl2组中p-AMPK表达沉默/下降,Runx2较正常组蛋白表达明显降低（p<0.05）,提示AMPK正调控Runx2;C P组中Runx2表达较CdCl2组降低（p<0.05）,提示CP可通过激活AMPK上调Runx2。HPLC结果显示,Pro-Hyp标准曲线为y=4E+07x+15854,R2=0.9998;Gly-Pro-Hyp为y=4E+06x+15934,R2=0.9996,线性关系良好;低、中、高浓度的Pro-Hyp的平均回收率分别为97.30%、98.46%、99.94%,RSD值为0.81%、1.76%、2.03%,Gly-Pro-H yp回收率为98.83%、97.80%、99.20%,RSD值为1.95%、2.02%、1.92%,提示小分子肽的加样回收率良好。与正常组比较,CdCl2组中Pro-Hyp含量显著下降（p<0.05）,125,250,500μg/m L CP组以及500μg/m L Gly-Pro-Hyp组中Pro-Hyp、Gly-Pro-Hyp的含量较CdCl2组均升高（p<0.05）,提示成骨细胞可将CP代谢为小分子短肽。结论:2μM的CdCl2作用24 h成功复制Saos-2细胞体外损伤模型,CP抑制Saos-2细胞中CdC l2诱导的Saos-2细胞损伤,其机制可能与CaMKK/AMPK/Runx2的下调相关,并且成骨细胞具有将CP代谢为小分子活性肽Pro-Hyp和Gly-Pro-Hyp的能力。