七氟醚后处理对大鼠缺血再灌注脑损伤与自噬的影响

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目的:评价七氟醚后处理对大鼠缺血再灌注脑损伤与自噬的影响。方法:1.实验对象及分组:清洁级健康雄性SD大鼠75只,280~350g,采用随机数字表法分为假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(I/R组)和0.5MAC、1 MAC、1.5 MAC七氟醚后处理组(SPⅠ、SPⅡ、SPⅢ组)。2.大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤及七氟醚后处理模型的制作:采用Zea-Longa大脑中动脉线栓法阻闭2h后恢复灌注的方法制备大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,SP组于恢复灌注即刻给予不同浓度七氟醚吸入,持续30 min。3.神经功能缺陷评分与测定脑梗死体积测定:大鼠于再灌注24h行神经功能缺陷评分(NDS),72h后处死,用TTC法测定脑梗死体积。4.Western blot测定自噬标志物:大鼠局灶性脑缺血再灌注2h处死大鼠并取新鲜脑皮质行westorn blot检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、beclin-1蛋白变化。5.透射电镜观察自噬小体:大鼠在再灌注2h后用4%多聚甲醛经心脏灌流,后取新鲜大鼠脑皮质,固定在5%戊二醛中,用于制作标本,并用透射电镜观察自噬小体形态及数目。结果1.大鼠神经功能缺陷评分(NDS)结果显示:与S组比较,其他各组24h神经功能缺陷评分增加(P<0.05),与I/R组比较,SPⅠ、SPⅡ、SPⅢ组24h神经功能缺陷评分降低(P<0.05),与SPI组比较,SPⅡ、Ⅲ组24h神经功能缺损评分降低,SPⅢ组优于SPⅡ组(P<0.05)。2.脑梗死体积结果显示:与S组比较,其他各组的脑梗死体积明显增加(P<0.05),与I/R组比较,SPⅠ、SPⅡ、SPⅢ组的脑梗死体积明显减少(P<0.05),与SPI组比较,SPⅡ、SPⅢ组的脑梗死体积明显减少,且SPⅢ小于SPⅡ(P<0.05)。3.Westorn blot免疫印迹结果显示:与S组比较,其他各组脑皮质中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin-1的表达上调(P<0.05);与I/R组比较,SPⅠ、SPⅡ、SPⅢ组脑皮质中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin-1的表达下调(P<0.05);与SPI组比较,SPⅡ、Ⅲ组脑皮质中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin-1的表达下调,SPⅢ组少于SPⅡ组(P<0.05)。4.透射电镜观察结果显示:与S组比较,I/R、SPI、SPⅡ组脑皮质中自噬小体数目增加(P<0.05),SPⅢ组自噬小体数目只有增加趋势,无统计学意义(P>0.05);与I/R组比较,SP各组脑皮质中自噬小体的数目减少(P<0.05);与SPI组比较,SPⅡ、Ⅲ组脑皮质中自噬小体数目的表达减少,SPⅢ组少于SPⅡ组(P<0.05)。结论:七氟醚后处理可减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤且存在着量效关系,其机制可能与抑制自噬有关。
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