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目的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(Carbapenem resistant Enterobacteriaceae,CRE)引起感染的死亡率高,对临床管理和公共卫生造成严重的威胁,给临床治疗带来巨大挑战,CRE的耐药、传播机制及流行特征的阐明对感染的防控及治疗起到重要的作用。目前,在中国对耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌(Carbapenem resistant Enterobacter cloacae,CRECL)的研究多为单中心或个例研究,尚缺乏多中心的研究,延边地区的CRE研究尚属空白,为进一步了解我国CRECL以及延边地区CRE流行情况,收集多中心CRECL以及延边地区CRE菌株进行分子及耐药特征研究,为CRE感染的预防、控制及治疗提供科学依据。方法1.自2012年11月至2016年8月,从中国11个城市的12家医院,收集不重复的CRECL55株,用琼脂稀释法进行药敏试验;采用PCR法检测碳青霉烯酶、β-内酰胺酶基因(AmpC和ESBLs)和多位点序列分型(MLST)分析菌株的谱系关系;质粒接合试验检测耐药基因的可转移性;选择23个NDM-1阳性分离株进行PFGE检测;S1-核酸酶PFGE和Southern印迹杂交分析携带NDM-1阳性质粒的大小。2.收集延边地区住院患者临床样本中分离的CRECL及PICU患儿中分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(Carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP),均为非重复株,采用PCR法检测碳青霉烯酶、β-内酰胺酶基因(AmpC和ESBLs)和MLST及PFGE分析菌株的谱系关系。3.采集分离耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌相应患者的病例信息。结果1.55株阴沟肠杆菌对多粘菌素B敏感率为100%,其次为阿米卡星和替加环素,敏感率分别为89.1%和78.2%,对亚胺培南和美罗培南的敏感率分别为12.7%及16.4%。对米诺环素、左氧氟沙星、环丙沙星和哌拉西林/他唑巴坦的敏感率分别为52.7%、30.9%、25.5%和20.0%,对头孢曲松、头孢他啶、头孢噻肟和头孢吡肟的敏感率为1.8%。2.55株阴沟肠杆菌中50株菌检出产7种型别碳青霉烯酶NDM-1、NDM-5、IMP-4、IMP-26、IMP-1、KPC-2 和 VIM-1,其中 NDM-1 所占比例高,占 68.0%。3.55株中共检测到24种ST型,最常见为ST418(20.0%),其次ST93(14.55%);10株CRECL有9株质粒成功转移;PFGE分型显示A-M 13个型别,深圳的8株显示A型,其余15株显示B-M 12种型别;S1-核酸酶PFGE和Southern印迹杂交分析显示携带NDM-1的质粒大小约52～58kb。4.延边地区CRECL中,共检测到4种型别碳青霉烯酶,包括IMP-26、NDM-5、NDM-1和KPC-2,主要为IMP-26型酶6株(50.0%),其次NDM-5型酶3株(25.0%);MLST结果显示5种型别,ST544为主(6株,50.0%);PFGE显示12株分属4个集群。5.PICU14株肺炎克雷伯菌中,共检测到2种型别碳青霉烯酶,分别为KPC-2型酶8株和NDM-1型酶6株;MLST结果显示ST11(8株)和ST1224(6株),PFGE显示14株中出现A-D型,ST11属于A、B型,ST1224属于C、D型。6.临床病例分析发现,感染耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的易感因素为患有新生儿肺炎或重症肺炎,以及曾使用二代或四代头孢菌素。结论1.CRECL对β-内酰胺类药物敏感率较低,仅对多粘菌素B、替加环素及阿米卡星等少数药物敏感,给临床用药提供参考;产碳青霉烯酶是CRECL的主要耐药原因,以产金属酶为主,其中携带NDM基因菌株占首位;ST418是阴沟肠杆菌的主要流行株,具有地区差异性;携带NDM-1基因的耐药质粒大小为52～58Kb,部分质粒可通过接合发生水平转移。2.产碳青霉烯酶是延边地区CRECL耐药的主要原因,以IMP-26型酶为主,ST544型CRECL为主要流行株。3.ST1224型及ST11型CRKP为延边地区PICU主要流行株,患有基础疾病及曾使用二代或四代头孢菌素可能为CRKP发生感染的危险因素。