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目的探索构树叶蛋白提取的最优条件，并从提取叶蛋白过程中产生的上清液中提取多糖和黄酮；为进一步研究其功能，探索小鼠表皮干细胞的提取方法并对所提取的细胞进行形态、表面标记物、诱导分化鉴定；研究黄酮类物质对小鼠表皮干细胞体外增殖的影响，从而为构树叶资源的合理利用提供新的方向。方法1.构树叶蛋白、多糖及黄酮类成分的综合提取1.1利用碱提醇沉的方法对构树叶进行叶蛋白及多糖的提取，先采用单因素设计，在不同的液料比，不同的碱液浓度，沉蛋白时不同的pH值，不同的浸提温度对构树叶叶蛋白及多糖进行提取，再利用正交实验的方法得出其提取的最优方案。1.2采用GB5009.5-2010半微量凯氏定氮法对提取的叶蛋白进行蛋白质含量测定；采用苯酚—硫酸法对测定所提取的总多糖含量；采用直接比色法测定醇提物中黄酮类物质的含量。2.小鼠表皮干细胞的提取，鉴定及诱导分化2.1采用快速贴壁和磁珠分选两种方法从出生0-3天的BALB/c小乳鼠的背部皮肤中提取表皮干细胞，采用CCK-8法绘制细胞生长曲线，比较两种方法提取的表皮干细胞的增殖情况。2.2利用DispaseⅡ消化小乳鼠背部皮肤，使表皮与真皮分离，将所获得的表皮进行胰蛋白酶酶解，获得总的表皮细胞，采用免疫磁珠分选法从总的表皮细胞中提取CD49f+/CD71-的细胞，通过对所获得的细胞进行荧光观察，细胞计数并计算该细胞的分选率。2.3分选后，通过相差显微镜对原代培养的CD49f+/CD71-细胞进行形态学观察。2.4将分选的原代细胞培养3-5天后，采用免疫细胞荧光化学（ICC）实验，对CD49f+/CD71-细胞进行表皮干细胞标记物整合素β1的鉴定。2.5将分选的CD49f+/CD71-细胞培养铺至培养皿的80%-90%，利用成脂诱导培养基诱导分化15天，以油红O染色，于相差显微镜下观察脂滴的形成情况，以确定是否成脂诱导分化成功。3.黄酮类物质对小鼠表皮干细胞增殖的影响3.1将分选成功的CD49f+/CD71-接种至96孔板中，贴壁培养24h,加入不同浓度的黄酮类物质，采用CCK-8法，在不同的时间点测定黄酮类物质对表皮干细胞的增殖影响。3.2统计分析:采用SPSS17.0统计软件，进行成组比较t检验，以P<0.01为有显著性差异，即有统计学意义，并进行Pearson相关分析，检验水准a=0.05。结果1.构树叶蛋白、多糖及黄酮类成分的综合提取1.1构树叶蛋白及多糖提取实验表明：当液料比为25ml/g，NaOH溶液的质量分数为0.8%，沉蛋白时pH值为3.50，浸提温度75℃时为单因素下蛋白提取的最优条件；当液料比为20mL/g，NaOH溶液的质量分数为1.0%，沉蛋白时pH值为4.00，浸提温度75℃时为单因素下多糖提取的最优条件；正交实验结果表明：蛋白提取的最优条件为30ml/g液料比，质量分数为1.0%的NaOH溶液，沉蛋白时pH值为3.00，75℃的浸提温度，多糖提取的最优条件为30ml/g液料比，质量分数为1.0%的NaOH溶液，沉蛋白时pH值为4.00，75℃的浸提温度。1.2经过微量凯氏定氮法测定，构树叶粗提物蛋白中蛋白含量约为40%-42%。在30ml/g液料比，质量分数为1.0%的NaOH溶液，沉蛋白时pH值为3.00，60℃的浸提温度的提取条件下，经测定多糖的提取率为1.381%，黄酮类物质约占醇提物的0.4509%。2.小鼠表皮干细胞的提取，鉴定及诱导分化2.1对通过快速贴壁法及免疫磁珠分选两种方法所提的细胞进行增殖能力比较，结果说明免疫磁珠分选法提取CD49f+/CD71-的细胞增殖能力要比快速贴壁法获得的细胞增殖能力强。2.2免疫磁珠分选法提取CD49f+/CD71-细胞的分选率约为17.0%。2.3形态观察发现培养的CD49f+/CD71-细胞呈典型的铺路石状生长。2.4免疫细胞荧光化学（ICC）实验说明CD49f+/CD71-细胞为整合素β1阳性。2.5所提取的CD49f+/CD71-细胞可诱导分化为脂肪细胞。3.黄酮类物质对小鼠表皮干细胞增殖的影响黄酮类物质有抑制小鼠表皮干细胞增殖的作用（P<0.01），且有一定的量效关系。结论1.从构树叶中综合提取出叶蛋白，多糖及黄酮类物质；并通过单因素分析及正交实验并获得叶蛋白和多糖的最佳提取条件。2.采用快速贴壁法及免疫磁珠分选法成功提取了表皮干细胞，通过比较增殖能力，确定了免疫磁珠分选法所获得的细胞增殖能力较强。3.经显微镜观察免疫磁珠所提取的CD49f+/CD71-细胞的形态学特征并经细胞免疫荧光鉴定、成脂诱导实验说明其具有成脂分化的能力，证实所提取细胞为表皮干细胞。4.提取的黄酮类对培养的表皮干细胞有抑制增殖作用，抑制作用与浓度有高度相关性。