猪繁殖与呼吸综合征病毒地方分离株PRRSV-SCMS MN蛋白基因的克隆及序列分析

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猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病毒属动脉炎病毒科动脉炎病毒属,引起母猪繁殖障碍的重要病原之一,该病自发现以来已给世界各国养猪业造成了巨大的经济损失。 本实验通过流行病学调查,从四川省某猪场发生繁殖障碍的母猪血清中,用MARC-145细胞培养,分离到一株PRRSV,命名为SCMS。盲传至第四代出现明显病变,电镜观察病毒粒子呈球形,其大小为40-80nm,核心直径为20-40nm。5`-溴-2`-脱氧尿核苷(BUDR)对其无抑制作用,属RNA病毒。病毒毒力测定TCID50为10-4.46/0.05ml,中和指数为100。 根据Genbank中北美洲株ATCC VR-2332的序列利用Oligo6.0设计一对特异性引物,以SCMS RNA为模板,通过RT-PCR扩增出长约1.0kb的基因片段,将其插入克隆载体质粒pMD18-T的EcoRV酶切位点处,构建重组质粒pMD 18-T-MN,对克隆的MN基因进行序列测定,测序结果显示SCMS MN基因全长886bp,包含完整的MN基因的开放阅读框架,编码297个氨基酸。将MN序列与VR2332和LV的MN基因进行同源比较,结果显示,核苷酸序列同源性分别为99.7%,61.6%。根据M基因推导的氨基酸序列同源性分别为98.9%,78.7%,根据N基因推导的氨基酸序列同源性分别为100%,52.8%。结果表明SCMS地方分离株与VR2332株在基因型上更为接近,应属于美洲型。
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