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侵袭性真菌病常见于采取化学疗法的癌症患者、器官移植受体、HIV/AIDS患者等免疫能力低下人群。在癌症患者体内,HSP90分子伴侣系统异常活跃,参与肿瘤细胞的形成、转移、侵略以及对抗肿瘤药物产生耐药性等进程,其共分子伴侣亦参与其中。在真菌中,HSP90已经被证明与真菌抗药性的产生直接相关,它通过稳定细胞蛋白稳态、缓冲细胞遗传变异等方式,使真菌获得HSP90依赖型的短暂药物耐受能力及HSP90非依赖型的长期抗药性。然而,其众多共分子伴侣是否参与此过程,目前依然没有明确的答案。 我们以粗糙脉孢菌为研究材料,研究HSP90系统各因子在真菌对唑类药物胁迫响应过程中的机制。通过对HSP90系统中众多共分子伴侣进行筛选,我们发现其中sti1、aha1、p23等基因敲除后,粗糙脉孢菌对唑类药物和高温表现出超敏感,但对其它抗真菌药物和氧化胁迫不敏感,说明这些共分子伴侣参与唑类药物与温度胁迫的响应。此外,相比于单基因敲除菌株,双敲除株△p23△sti1和△p23△aha1对唑类药物和温度更敏感,而对△sti1和△p23敲除株的回补则使其回复了相当于野生型的对唑类药物的敏感性。HSP90抑制剂格尔德霉素与唑类药物的联用也表明,sti1和p23通过HSP90发挥其调控粗糙脉孢菌对唑类药物抗药性的作用。 经过对敲除株在转录水平和麦角甾醇合成水平上的分析,我们明确了sti1、aha1和p23调控唑类药物耐受途径的方式。当粗糙脉孢菌受到唑类药物胁迫时,ERG11被抑制,麦角甾醇合成受阻,从而导致有毒中间产物的积累,造成细胞膜胁迫。从转录水平上,sti1、aha1和p23通过HSP90系统间的循环调控响应唑类药物造成的细胞膜胁迫,并通过选择性帮助其目标蛋白行使功能,正向调控erg11、erg6和erg3等麦角甾醇合成途径关键基因,同时负向调控ads-4、ccg-8等与唑类药物响应相关的转录因子,从而保证最终合成充足的麦角甾醇并减少有毒甾醇积累量以维持细胞的生命活动。 另外,在真菌中,HSP90、STI1、AHA1和p23等HSP90系统各组件在蛋白序列上高度保守;对轮枝镰刀菌中sti1和p23同源基因的敲除同样造成其对唑类药物敏感性的增加,说明它们在真菌中的功能具有保守性。 总之,我们的研究发现sti1、aha1和p23等基因对于真菌在唑类药物响应中具有关键作用,它们通过HSP90分子伴侣系统调控真菌中麦角甾醇合成途径各关键酶基因的表达,赋予真菌对唑类药物的抗药性。由于在肿瘤进程和并发的侵袭性真菌病的抗药性中均发挥着重要作用,STI1和p23等HSP90共分子伴侣具有作为新的药物靶标的潜力,以开发用于癌症和并发的侵袭性真菌病的临床治疗药物和方法。