禽腺病毒4型的分离鉴定及毒种免疫原性研究

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 7次 | 上传用户:yijun5802382
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"心包积液肝炎综合征"(hydropericardium-hepatitis syndrome,HHS)是由禽腺病毒4型引起的一种以鸡的心包积液和包涵体肝炎为特征的疾病。自2015年7月我国多个省相继暴发了该病,且多个品种鸡都易感。本研究应用ELISA检测病鸡血清抗体、PCR扩增病毒的hexon基因、病料接种SPF鸡胚卵黄囊分离病毒、动物回归实验、灭活病毒免疫试验等方法对该病进行临床调查、病毒的分离鉴定、毒株免疫原性研究,结果表明:(1)5个发病鸡场均有禽腺病毒感染,PCR扩增出了 4个大小为2819bp左右的目的基因,4个毒株同源性较高,均属于禽腺病毒4型;(2)从一个鸡场的病料接种鸡胚分离到一株无血凝性的病毒毒株,该毒株回归动物复制出了与该病相同的临床症状,在电镜下观察到肝细胞中有典型的腺病毒粒子。分离到的毒株通过卵黄囊、绒毛尿囊膜和尿囊腔三个途径感染鸡胚,发现通过绒毛尿囊膜感染鸡胚最适合病毒的增值,用该途径分离的毒株ELD50为105.1/0.1mL,该毒株能够使LMH细胞产生明显病变:(3)毒株感染34dSPF鸡第3d开始出现临床症状,4d~6d为死亡高峰期,第7d后病鸡开始恢复,发病率为75%,死亡率为67.86%。鸡感染病毒后第6d开始出现血清抗体,第10d抗体水平达到峰值。发病鸡眼观病变主要出现在肝脏,尤其是感染后第5d病变最严重,病理组织学检查见肝细胞核内有嗜酸性和嗜碱性的包涵体。免疫组织化学染色显示,病毒抗原主要分布在肝细胞、脾脏的网状细胞和肾脏的肾小管上皮细胞中;(4)分离毒株灭活后分0.2mL/只、0.3mL/只、0.5mL/只和1mL/只四个不同剂量免疫21d SPF鸡,32d后攻毒,攻毒后对照鸡80%死亡,免疫组100%存活。结论:调查的5个发病鸡场均感染了 FAdV,用其中一个发病鸡场的病料分离到一株FAdV 4型的强毒力毒株,该毒株灭活后免疫鸡群,对鸡有良好的保护效果。
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