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【目的】 本研究拟通过体外分离和纯化成人骨髓间充质干细胞,体外定向诱导分化为血管内皮、血管平滑肌样细胞,探讨为组织工程血管的构建提供种子细胞的可能性。 【方法】 1、成人骨髓间充质干细胞的分离、培养和扩增: 收集骨髓血,提取单个核细胞进行体外培养扩增,冻存复苏细胞后继续培养传代。 2、定向诱导间充质干细胞向血管平滑肌样细胞分化 用含10-8M AT-RA、0.5×10-3M db-cAMP的培养液诱导3天,然后在普通培养液中培养传代,连续观察21天。 3、定向诱导间充质干细胞向内皮样细胞分化 用含10ng/ml VEGF培养液诱导细胞,连续诱导观察21天。 【结果】 1、间充质干细胞特性 本实验分析了5个标本,每个标本体外扩增10代可获细胞数为8×1010个左右;细胞高表达CD105,弱表达KDR。 2、诱导间充质干细胞向平滑肌样细胞定向分化 诱导12天后细胞呈SMA强阳性表达;细胞融合成片时形成典型的峰谷样外观;透射电镜显示胞浆内肌丝形成;诱导14天后细胞上清液中胶原蛋白Ⅰ含量为18.093±8.968ug/106cell/ml。 3、诱导间充质干细胞向内皮样细胞定向分化 诱导14天后细胞VWF强阳性表达;接近融合细胞外观呈现为特征性的鹅卵石样形态;透射电镜显示胞质内可见大量的吞饮小泡;将诱导后14天细胞接种在细胞外基质凝胶(ECMgel)中可形成毛细血管样结构;诱导14后天细胞上清液中6-酮-前列素F1α含量为29.939±19.935pg/106cell/ml。