食物过敏是一种机体免疫系统对食物的异常反应,也是潜在致命的免疫反应。随着食物过敏的患病率增加,给个人、家庭、社会带来了日益严重的健康经济问题,因此食物过敏逐渐成为颇受关注的公共卫生问题。如何防治食物过敏已经成为目前的研究热点。枳实总黄酮是一种天然来源的黄酮类物质,具有抑制血栓的形成,抑制组胺引起的痉挛性收缩,减轻脂多糖引起的肝毒性,并且具有抗氧化、抗癌、抗肿瘤等活性。目前为止,尚未发现有关枳实总黄酮的抗过敏活性研究。本文以枳实总黄酮提取物为研究对象,通过体内、体外实验结合网络药理学模拟,探讨枳实总黄酮提取物抗过敏活性机制。首先,采用RBL-2H3细胞脱颗粒模型和OVA诱导小鼠过敏性哮喘模型来探讨枳实总黄酮提取物抗过敏活性;最后采用网络药理学分析预测枳实总黄酮中四种主要黄酮类成分橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷、芸香柚皮苷对过敏性哮喘的作用靶点及可能机制,为枳实总黄酮在防治食物过敏方面的应用提供一定的科学依据。研究内容如下:采用肥大细胞脱颗粒模型,通过甲苯胺蓝染色考察枳实总黄酮提取物对RBL-2H3细胞状态的影响;测定RBL-2H3细胞β-HEX、组胺以及IL-4释放水平,利用荧光显微镜观察细胞钙离子内流情况。结果表明,枳实总黄酮在0-120μg/m L药物浓度范围之内,能够显著抑制RBL-2H3细胞β-HEX、组胺以及IL-4的释放,也减轻了钙离子内流,与药物浓度呈现依赖性。证明枳实总黄酮能抑制RBL-2H3细胞脱颗粒。采用小鼠过敏性哮喘模型,对小鼠体重、体温、行为以及粪便评分,考察枳实总黄酮提取物对小鼠生命体征的影响。通过测定小鼠血清中抗体水平和小鼠肺泡灌洗液中的相关炎症因子水平,来考察枳实总黄酮提取物对小鼠机体内抗体和炎症因子的影响。通过测定小鼠免疫器官指数,探讨枳实总黄酮提取物对小鼠免疫器官的影响。利用HE和PAS染色小鼠肺组织,考察枳实总黄酮提取物对小鼠肺组织炎症细胞浸润情况的影响。结果表明,枳实总黄酮能够抑制过敏性哮喘导致机体体重减轻、体温下降等症状,显著降低了血清中抗体和小鼠肺泡灌洗液中炎症因子水平,并且缓解肺组织中炎症细胞浸润,证明枳实总黄酮具有抗过敏活性。网络药理学模拟:预测枳实总黄酮中橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷、芸香柚皮苷这四类主要黄酮成分的潜在作用靶点,筛选出过敏哮喘疾病相关的靶点,获得这四类黄酮成分治疗过敏性哮喘的交集靶点,利用PPI交互网络挖掘核心靶点,对核心靶点进行分子对接和富集分析,探讨枳实黄酮作用于过敏性哮喘的相关机制。结果表明,枳实黄酮中的橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷和柚皮苷四类主要黄酮成分与过敏性哮喘相互作用的关键靶点为TP53、TNF、CASP3、STAT3等。通过富集分析表明,枳实黄酮化合物抗过敏哮喘的靶点参与了信号转导等生物过程。主要涉及的信号通路有TNF、PI3k-Akt和MAPK通路。分子对接结果显示,四种黄酮化合物对CASP 3和TNF-α具有良好的结合活性。证明枳实总黄酮可能通过作用于TNF、PI3k-Akt和MAPK通路中靶点来实现抗过敏活性。