卵巢癌特异性分子探针的制备及初步体外实验研究

来源 :重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:guao_jie
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目的:构建针对卵巢癌的SPIO-PLL-pshRNA分子探针,并初步评价其体外转染卵巢癌SKOV3细胞及MR成像的可行性。方法:利用静电吸附法连接SPIO-PLL复合物及质粒pGenesil1-shRNA,微量分光光度计检测不同比例SPIO-PLL-pshRNA复合物离心后上清液中游离质粒浓度,评测SPIO-PLL与质粒的结合能力,确定制备SPIO-PLL-pshRNA分子探针的最佳质量比;凝胶阻滞实验及zeta电位测定进一步验证探针中SPIO-PLL与质粒的结合情况;CCK-8法检测探针的细胞急性毒性;普鲁士蓝染色法初步观察探针转染细胞情况;荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达来进一步评价探针的细胞转染能力;透射电子显微镜观察探针中SPIO在细胞中的部位;MR扫描观察探针转染细胞后信号强度的改变。结果:DNA结合实验、凝胶阻滞实验结果显示,当SPIO-PLL复合物和质粒pGenesil1-shRNA的质量比达6:1时,二者可有效结合;激光粒度仪测定SPIO、SPIO-PLL、SPIO-PLL-pshRNA三组样品的zeta电位分别为(-14.8±0.35)mV、(15.2±0.55)mV、(3.6±0.35)mV,三组结果差异有统计学意义(ANOVA:F=6323.782,P=0.000;LSD:均P=0.000);细胞毒性试验结果显示,在探针浓度低于50mg/L的范围内,本研究由国家自然科学基金资助(编号:81171366)细胞存活率高于80%;所制备的SPIO-PLL-pshRNA分子探针体外转染卵巢癌SKOV3细胞后,普鲁士蓝染色法可检测到细胞内有铁颗粒分布,荧光显微镜观察细胞内有绿色荧光蛋白表达,透射电子显微镜下见到探针中的铁颗粒存在于细胞胞浆内;MR成像结果示,探针转染细胞后T2*信号强度明显降低,且随着探针浓度升高,信号强度越低,各浓度组T2*信号强度差异有统计学意义(ANOVA:F=279.667,P=0.000;SNK:均P<0.05)。结论:成功制备针对卵巢癌的特异性分子探针,该探针在体外能成功转染卵巢癌SKOV3细胞,对细胞毒性小,且能被MR扫描的T2*WI序列敏感检测。
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