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选育耐高温乙醇酵母应用于燃料乙醇生产工业,可以提高乙醇的生产效率,降低发酵和蒸馏成本,同时可以缓解发酵废弃物对环境的污染。本文从不同来源的样品中分离得到59株耐高温酵母菌,经温度梯度初筛和TTC复筛后获得2株耐高温的产乙醇酵母菌株WXT3和K213。分离菌株WXT3和K213可在25-48℃和25-45℃条件下生长；均能适应宽泛的pH值范围(2.0-9.0、3.0-9.0)；2菌株的生长繁殖不需要补充维生素等生长因子,可利用包括五碳糖在内的多种碳源；均能耐受6%(v/v)的乙醇和40%(w/v)的葡萄糖。此外,除WXT3能耐受10%的NaCl (w/v),在分类特征上均能在含有0.01%的放线菌酮的培养基上生长；产酸；但是不产类淀粉化合物。根据其5.8S+ITS区域核酸序列的同源性分析、形态和菌株生理特性研究,鉴定WXT3和K213分别为Ogataea sp和Kluyveromyces marxianus,并命名为Ogataea sp. WXT3和Kluyveromyces marxianus K213。分离菌株的乙醇发酵特性研究结果显示,WXT3在42-C发酵15%(w/v)葡萄糖96h,得到44.57g/L(0.30g/g葡萄糖)的乙醇,转化率是理论值的58.3%；而K213在42℃发酵15%(w/v)葡萄糖48h得到68.77g/L(0.46g/g葡萄糖)的乙醇,转化率是理论值的89.9%。为了得到能在高温下发酵生产高浓度乙醇的酵母菌株,本文选择耐高温分离菌株K213和工业菌株安琪酵母作为亲本,采用原生质体融合技术选育了性状优良的发酵菌株,并对其进行了乙醇发酵特性的研究。首先,选择双灭活原生质体为遗传标记,采用PEG法将K213酵母与安琪酵母进行原生质体融合,获得既耐高温乙醇产率又较高的融合子Ka911和Ka914。融合子Ka911和Ka914遗传性状稳定,传代培养5次(每24h转接1次)后,融合子的生长和产乙醇率和初代相比没有明显变化。融合子Ka911和Ka914细胞体积和菌落大小、形态接近于出发菌株K213；分析融合菌株的5.8S+1TS rDNA序列,融合菌株的碱基和安琪酵母的碱基存在差异较大；和K213的碱基存在的差异较小,只有个别位点的碱基不一样。其次,进行了融合菌株的发酵特性研究,融合菌株Ka911和Ka914在45℃发酵葡萄糖生产乙醇38.15g/L和42.84g/L；分别是高乙醇产量出发菌株安琪酵母在该温度条件下乙醇产量(1.71g/L)的22.3倍和25.1倍：分别是耐高温出发菌株Kluyveromyces marxianus K213乙醇产量(43.46g/L)的87.8%和98.6%。48℃时,分别生产乙醇42.35g/L和38.00g/L；分别是出发菌株Kluyveromyces marxianusK213生产的乙醇(1.89g/L)的22.4倍和20.1倍。融合菌株的耐受温度较出发菌株安琪酵母提高6-C,较K213提高3℃,乙醇产量和出发菌株相似。通过原生质体融合获得了能在更高的温度下高产乙醇的酵母菌株。