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Micro RNA(miRNA)是一类长度在18-25nt间的小的非编码RNA。它们通过碱基互补配对原则作用于靶基因的3’UTR上,引导RNA介导的沉默复合物(RISC)结合到靶位点,从而影响靶基因的mRNA稳定性或者蛋白翻译,进而调控相应的生物学过程。由于miRNA表达的时空特异性,其在许多生物学过程序中发挥重要作用,例如细胞分化、细胞增殖、细胞凋亡以及发育等方面。其中miR-302/367在促进细胞重编程以及胚胎发育中起着重要作用。关于miR-302/367对F9细胞多能性维持方面的研究未见报道,所以本文对F9细胞中多能性相关因子、促分化相关因子以及细胞增殖等方面进行研究,从而探究miR-302/267在F9细胞自我更新以及多能性维持方面的作用。研究发现反式维甲酸(retinoic acid,RA)处理细胞可以影响F9细胞形态,促进分化相关基因aFP、Clnd6、Thbd和GATA6的表达,抑制多能性相关基因Klf4、Nanog和Oct4等的表达。碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)染色发现miR-302/367具有维持细胞形态的作用。为了产生这种结果,采用实时定量PCR和Western Blot实验方法研究miR-302/367对多能性相关因子的作用,结果表明过表达miR-302/367可以促进多能性相关基因Nanog和Oct4在mRNA以及蛋白水平上的表达,同时可以拮抗RA引起的Nanog和Oct4的下调,部分恢复二者的mRNA以及蛋白水平。为了探究miR-302/367对促分化相关基因的作用,通过双荧光素酶报告检测发现Smad2和TgfbrⅡ是miR-302/367的靶基因,进一步通过实时定量PCR以及Western Blot发现miR-302/367抑制TgfbrⅡ的表达,并且可以将RA诱导的Smad2和TgfbrⅡ恢复至正常水平。细胞增殖对于细胞多能性维持及自我更新具有重要作用,为了研究miR-302/367对于F9细胞增殖的影响,进行了CCK-8细胞计数实验,发现miR-302/367可以促进细胞增殖。综上所述,miR-302/367通过维持多能性相关基因、抑制促分化相关基因的表达以及促进细胞增殖等方面来维持F9细胞的多能性及自我更新。