论文部分内容阅读
目的：探讨纯化的日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3(rSi14-3-3)及其相应单克隆抗体对日本血吸虫病的诊断价值。方法：大量制备、纯化rSj14-3-3，同时将本室筛选出的分泌抗14-3-3单抗的杂交瘤细胞接种BALB／c小鼠，获取重组Si14-3-3单克隆抗体并纯化。利用纯化的rSi14-3-3抗原间接ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)方法检测急、慢性以及治疗前和治疗后2、4、6、12个月日本血吸虫病患者及不同感染度、不同感染时期和用吡喹酮治疗后2、4、6个月的感染日本血吸虫的兔血清中特异性抗体；并用纯化的抗rSi14-3-3单克隆抗体为捕捉系统，以纯化的兔抗rSj14-3-3多抗和酶标羊抗兔多抗为检测系统的酶联免疫吸附试验(P-M-ELISA，polyclonal antibody-monoclonal antibody sandwishELISA)法检测相应患者血清中的循环抗原，以SEA-ELISA作为对照，探讨rSj14-3-3及其单抗用于诊断日本血吸虫病的价值。结果：得到大量纯化的rSj14-3-3；获得的抗rSj14-3-3 McAb(monoclonal antibody)亚型为IgG1，腹水效价为1×10~7；P-M-EHSA、rSjl4-3-3-EHSA与SEA-ELISA相比较，检测急、慢性日本血吸虫病患者敏感性差异无显著性[对急性患者血清检测，前两者检出率均为100％(45／45)，SEA-ELISA为97.8％(44／45)，对慢性患者血清检测，rSi14-3-3EHSA阳性率为93.3％(42／45)，P-M-ELISA为95.6％(43／45)，SEA-ELISA为95.6％(43／45)，P均＞0.05]，而与正常人、华支睾吸虫病和钩虫病患者交叉反应率rSj14-3-3-EHSA、P-M-ELISA法与SEA-ELISA差异有显著性[P均＜0.05，例如对正常人血清检测，前两者阳性率均为0(0／60)，SEA-ELISA则为6.7％安徽医科大学硕士学位论文查任远·2004(4/ 60)〕，对治疗后不同时期患者及不同感染度、不同感染时期和治疗后不同时期的感染日本血吸虫的兔血清，前两种方法与SEA口EUSA法之间均有不同程度的差异。结论:rsj 14一3一3检测急、慢性血吸虫病患者血清中的特异性抗体和利用抗rsj14一3一3单克隆抗体检测循环抗原具有高度的特异性和敏感性，抗原和单抗可规模化生产，易于标准化，且具有较好的疗效考核价值，体现出广泛应用于血吸虫病免疫诊断和流行病学现场调查的巨大潜能。