切花百合离体繁殖与多倍体培育的研究

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百合(Lilium brownii F.E.Br.var.viridulum Baker)是单子叶植物亚纲百合科(Liliaceae)百合属(Lilium)多年生球根植物,是世界名花之一,适合用作切花、盆花和园林布景,深受人们的喜爱,具有很高的商业价值和观赏价值。开展多倍体育种,是提高百合观赏品质和抗性的一条非常重要的途径。本研究共有10个百合供试品种,以索邦(Sorbonne)和提伯(Tiber)两个品种为试验材料,进行了组织培养体系的系统研究,在其筛选出的最佳培养基上,探寻其是否能成为适合其余8个品种的广谱培养基,利用秋水仙素和Oryzaline诱导得到了四倍体索邦和提伯新种质,以期得到具有价值的新材料,为百合的倍性育种奠定基础。百合离体快繁体系的研究结果表明:最佳的外植体消毒方式:鳞片用洗涤剂浸泡10min,自来水冲洗30min,75%乙醇消毒90s,0.1%升汞消毒13min,无菌水冲洗4~6次。初代诱导索邦提伯芽分化的最佳培养基均为MS+1.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA,诱导率达100%,成芽数为5.0以上。索邦最佳继代增殖的培养基为MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA,其增殖系数为6.25;提伯最佳继代增殖的培养基为MS+0.5mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA,增殖系数为5.0。索邦的最适生根培养基为1/2MS+0.5mg/L IBA,提伯的最适生根培养基为1/2MS+0.2mg/L IBA,植株和根系生长状况良好,生根率为100%,移栽成活率90%以上。将郁罗柠(Yelloween)、红蕊(Fangin)、奥塔里(Aotali)、肉色杰作(Rousejizuo)、布林迪西(Cordelia)、黑人蒙特(Mome Negro)、多安娜(Pollyanna)、南川百合(L.rosthornil)接种在索邦、提伯芽诱导、增殖和生根的最适培养基上,结果表明:这8个品种的鳞片都能在MS+1.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA培养基上诱导出芽,布林迪西、多安娜、肉色杰作的出芽率最高,其次是奥塔里、黑人蒙特、红蕊,出芽率最低的是南川百合和郁罗柠,最低的出芽率均达40%,所以认为MS+1.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA可以成为芽诱导百合鳞芽的广谱培养基。MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA是比较适合郁罗柠、红蕊、奥塔里、布林迪西的继代增殖培养,增殖系数能达到3.2以上。MS+0.5mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA比较适合肉色杰作、多安娜、黑人蒙特、南川百合的继代增殖培养,增殖系数能达到2.3以上。MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA、MS+0.5mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA是分别适合这8个品种增殖的广谱培养基。1/2MS+0.2mg/L IBA为适合郁罗柠、红蕊、奥塔里、肉色杰作、布林迪西、多安娜生根的广谱培养基,根系多长势好,利于移栽存活。利用秋水仙素溶液和Oryzaline溶液,采用浸泡法和混培法,对索邦提伯进行多倍体的诱导,两种化学剂以秋水仙素为好,两种方法中以浸泡法处理效果较好。索邦以0.05%秋水仙素溶液处理20h效果最好,提伯以0.02%秋水仙素溶液处理15h效果最好,获得的纯合四倍体植株最多,诱导率均为13.3%。混培法索邦以添加0.1%的秋水仙素处理15d为好,提伯以添加0.05%的秋水仙素处理15d效果最佳,可获得最多的纯合四倍体,诱导率分别为10.0%和6.7%。索邦以0.003%Oryzaline溶液处理9h为好,提伯以0.003%Oryzaline溶液处理6h效果最好,变异率最高,分别达到了13.3%和10.0%。对四倍体和二倍体百合植株进行了外部形态、气孔、保卫细胞特性的对比观察发现:四倍体植株的叶片增厚、叶长变短、叶形指数变小,索邦、提伯的叶厚分别是二倍体的200%和162.1%,叶长分别是二倍体的82.8%和75.8%。索邦和提伯四倍体的气孔密度明显下降,分别为二倍体的58.7%和71.4%;保卫细胞增大,长度分别为二倍体的142.5%和156.0%,宽度分别为二倍体的112.6%和160.8%;气孔大小较二倍体明显增大,长度为二倍体的127.6%、128.1%,宽度为二倍体的124.3%、170.1%。对四倍体和二倍体百合植株进行低温处理后,比较电解质外渗率和细胞膜损伤率。结果表明:同样的低温下,四倍体索邦提伯植株的电解质外渗率和细胞膜损伤率均比二倍体植株低,说明耐寒能力、抗旱性都是四倍体较强。
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